论文题目: 用重组工程技术修饰E.coli染色体及建立新型重组疫苗载体研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 遗传学
作者: 李山虎
导师: 黄翠芬,周建光
关键词: 重组工程,活菌疫苗载体,疫苗,粘膜免疫
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 重组活菌载体疫苗是将所需的特异性抗原基因插入活细菌染色体或质粒载体中,提呈抗原以达到预防一种或多种疾病的新型疫苗。活菌载体疫苗在诱发机体产生黏膜免疫方面具有独特优点,也可产生细胞免疫和体液免疫应答。目前,作为该类疫苗载体的细菌主要是以减毒的微生物(如沙门氏菌)为主,该类疫苗载体存在临床上的毒副作用等问题。因此,有必要研究和建立更加安全有效的新型细菌疫苗载体。 以正常大肠杆菌作为传染病疫苗载体或者肿瘤治疗载体的研究近年来受到了关注。大肠杆菌的遗传背景清楚,在体内无毒副作用,安全性好。其染色体DNA含有4.6×10~6个碱基,可以作为建立多价疫苗的一种大的载体。 为了解决大肠杆菌的染色体DNA修饰、抗原基因有效表达、没有黏附侵袭能力的问题,本课题从以下四方面开展了研究:一、建立修饰大肠杆菌染色体DNA的技术平台,二、筛选外源基因在染色体上的高效表达位点,三、建立具有黏附和侵袭能力的重组大肠杆菌新菌株,四、重组疫苗载体的动物免疫评价。 本研究首先建立与疫苗制备相关的重组工程技术包括:①基于线型DNA打靶分子的大肠杆菌体内基因剔除技术,②选择与反选择外源基因定位敲入染色体上特定位点技术,③Gap-repair体内克隆技术,④单链DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术,⑤建立“抗生素-酶切位点”选择反选择技术新技术。然后,为解决外源基因有效表达问题,我们选择了大肠杆菌染色体上的6个基因表达位点,将荧光素酶报道基因分别敲入其中,定量分析了外源基因的表达效率,发现在除去阻遏基因lacI后,外源基因能在lac操纵子的lacZ位置高效表达,表达效率明显高于多拷贝质粒。将外源蛋白与改构的外膜蛋白Lpp-ompA融合表达可高效表达并展示于细菌外表面,是活菌载体疫苗理想的抗原表达途径。外源基因在大肠杆菌染色体上的稳定表达并不影响细菌的生长繁殖。同时,为了使正常大
论文目录:
前言
第一部分 重组工程相关技术及新技术的建立
材料和方法
结果
小结
第二部分 大肠杆菌染色体外源基因敲入位点的选择
材料和方法
结果
讨论
小结
第三部分 构建黏附和侵袭性重组大肠杆菌
材料和方法
结果
讨论
小结
第四部分 新载体疫苗的初步动物免疫试验
材料和方法
结果
讨论
小结
总结
参考文献
本文采用的缩写词
综述
博士期间发表论文
致谢
发布时间: 2005-09-05
参考文献
- [1].DNA直接克隆的优化和ccdB反向筛选在Red/ET重组工程中的应用[D]. 王海龙.湖南师范大学2013
- [2].多元质粒工程技术及CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的建立与应用[D]. 李一凡.天津大学2015
相关论文
- [1].肠毒素大肠杆菌口服多价疫苗的研究[D]. 郑继平.中国人民解放军军事医学科学院2004
- [2].重组减毒细菌运送CD8～+T细胞表位的机理及携带新城疫病毒DNA 疫苗鼠伤寒沙门氏菌的免疫生物学特性研究[D]. 潘志明.扬州大学2004
- [3].鸡IL-2、IL-18、IFN-γ和CpG DNA在减毒沙门氏菌运送H5亚型禽流感核酸疫苗中的佐剂作用及鸡CD4和CD8分子单克隆抗体的研制[D]. 胡青海.扬州大学2005
- [4].新型DNA聚合酶的基因工程改造及应用研究[D]. 盛彦敏.吉林大学2005
- [5].防御素Defcr4和Mcp-1基因在牛乳腺中表达的研究[D]. 肖安东.吉林大学2005
- [6].双色荧光RNAi技术平台的建立和抗SARS-CoV RNAi的研究[D]. 魏映辉.吉林大学2005
- [7].新型双启动子DNA疫苗载体的研制及在人乳头瘤病毒疫苗研究中的应用[D]. 卞继峰.山东大学2003
- [8].GGNBP1和GGN2在小鼠睾丸中的表达及相互作用研究[D]. 赵庆国.中国人民解放军军事医学科学院2005
- [9].减毒沙门氏菌为载体的生长抑素DNA疫苗构建、表达及对草鱼生长影响研究[D]. 戴贤君.浙江大学2005
- [10].以减毒沙门氏菌携带共表达siRNA-Stat3及GRIM-19质粒抗前列腺癌的体内外实验研究[D]. 张灵.吉林大学2006