本文主要研究内容
作者程杰（2019）在《牛FGFR1基因启动子甲基化对转录的调控及其对成肌细胞增殖分化的影响》一文中研究指出：肌肉发育是一个高度协调的生物学过程,目前对肌肉发育的遗传基础已经有了较清晰的认识。其中涉及PAX基因(paired-homeobox transcription factor)家族,肌生成调节因子(myogenic regulatory factors,MRFs)家族,肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor 2,MEF-2)家族和各种复杂的信号通路。虽然骨骼肌形成的遗传基础很清楚,但是由于肌生成涉及的调控网络极其复杂,这一过程中涉及的一大部分调控因子仍然未知。因此,发掘新调控因子和进一步解析骨骼肌发育的分子机制仍然是迫切需要的。近些年来,随着组学研究的不断地深入,大量研究表明FGFR1基因对于肌肉发育有着非常重要的作用,本研究在其它家畜上有少量的报道,但是在牛上FGFR1基因对于肌肉发育的调控作用鲜有报道。因此,本研究利用载体构建,细胞培养,双荧光素酶报告系统,亚硫酸氢盐测序PCR,CCK-8,EdU,qPCR,RNA干扰,蛋白免疫印迹(Western Blot)和流式细胞术等技术对FGFR1基因调控成肌细胞增殖分化的分子机制开展了深入的研究。主要研究结果如下:1.FGFR1基因启动子活性区域筛选为了确定控制FGFR1基因转录的核心启动子,设计启动子不同区域的引物,将不同长度的截短体与线性的pGL3-Basic相连,将构好的载体转染C2C12和293T两个细胞系,测定双荧光,筛选出FGFR1基因的启动子活性核心区域位于FGFR1基因上游202 bp至509 bp和794 bp至1295 bp之间。利用在线软件JASPAR2018对活性区域794bp至1295 bp内结合的转录因子进行预测发现,在活性区域内具有多个与细胞发育相关的转录因子结合位点,如Sp1、EGR1和KLF5等转录因子。2.秦川牛FGFR1基因核心启动子区甲基化研究为了了解秦川牛不同生长时期肌肉组织中FGFR1基因核心启动子区是否存在差异甲基化及其对mRNA表达量的影响。运用亚硫酸氢盐测序PCR技术检测秦川牛胎牛、犊牛和成年牛三个生长时期肌肉组织中FGFR1基因启动子区甲基化状态,同时采用qPCR技术检测秦川牛三个不同生长时期肌肉组织中FGFR1基因mRNA的表达水平。秦川牛胎牛期(0.595%)肌肉组织中FGFR1基因启动子区甲基化水平显著低于犊牛时期(2.14%)(P<0.05);秦川牛胎牛时期肌肉组织中FGFR1基因mRNA表达水平显著高于犊牛时期(P<0.05)。因此,在秦川牛肌肉组织中FGFR1基因启动子区存在差异甲基化,并且启动子区的甲基化程度越高越能抑制FGFR1基因表达。3.FGFR1调控成肌细胞增殖分化的研究为了研究FGFR1基因对牛成肌细胞增殖分化的影响,利用EdU及CCK-8试剂盒法对细胞的增殖进行检测,发现与NC对照组相比,干扰FGFR1基因后细胞数目显著减少。利用流式细胞术对细胞周期进行检测,发现与NC对照组相比,siFGFR1基因G1期的细胞数显著增加,S期的细胞数显著减少。并且干扰FGFR1后,对增殖标志基因的mRNA和蛋白水平进行检测,与NC对照组相比,发现CylincD1,CDK2的表达量和蛋白量显著降低。对分化标志基因的mRNA和蛋白水平进行检测,MyoD和MyHC均有升高的趋势,但不显著,MyoG有下降的趋势,所以不足以证明它对分化的调控作用。以上结果表明,FGFR1对牛成肌细胞增殖有显著的促进作用。本文详细探究了FGFR1基因的转录调控及其对牛成肌细胞增殖分化的影响,为后续肉牛肌肉发育相关基因的研究提供了新的思路和研究基础,对于揭示中国地方黄牛肌肉发育的调控网络,为中国专门化肉牛品种的培育提供理论支持。
Abstract
ji rou fa yo shi yi ge gao du xie diao de sheng wu xue guo cheng ,mu qian dui ji rou fa yo de wei chuan ji chu yi jing you le jiao qing xi de ren shi 。ji zhong she ji PAXji yin (paired-homeobox transcription factor)jia zu ,ji sheng cheng diao jie yin zi (myogenic regulatory factors,MRFs)jia zu ,ji xi bao zeng jiang yin zi (myocyte enhancer factor 2,MEF-2)jia zu he ge chong fu za de xin hao tong lu 。sui ran gu ge ji xing cheng de wei chuan ji chu hen qing chu ,dan shi you yu ji sheng cheng she ji de diao kong wang lao ji ji fu za ,zhe yi guo cheng zhong she ji de yi da bu fen diao kong yin zi reng ran wei zhi 。yin ci ,fa jue xin diao kong yin zi he jin yi bu jie xi gu ge ji fa yo de fen zi ji zhi reng ran shi pai qie xu yao de 。jin xie nian lai ,sui zhao zu xue yan jiu de bu duan de shen ru ,da liang yan jiu biao ming FGFR1ji yin dui yu ji rou fa yo you zhao fei chang chong yao de zuo yong ,ben yan jiu zai ji ta jia chu shang you shao liang de bao dao ,dan shi zai niu shang FGFR1ji yin dui yu ji rou fa yo de diao kong zuo yong xian you bao dao 。yin ci ,ben yan jiu li yong zai ti gou jian ,xi bao pei yang ,shuang ying guang su mei bao gao ji tong ,ya liu suan qing yan ce xu PCR,CCK-8,EdU,qPCR,RNAgan rao ,dan bai mian yi yin ji (Western Blot)he liu shi xi bao shu deng ji shu dui FGFR1ji yin diao kong cheng ji xi bao zeng shi fen hua de fen zi ji zhi kai zhan le shen ru de yan jiu 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :1.FGFR1ji yin qi dong zi huo xing ou yu shai shua wei le que ding kong zhi FGFR1ji yin zhuai lu de he xin qi dong zi ,she ji qi dong zi bu tong ou yu de yin wu ,jiang bu tong chang du de jie duan ti yu xian xing de pGL3-Basicxiang lian ,jiang gou hao de zai ti zhuai ran C2C12he 293Tliang ge xi bao ji ,ce ding shuang ying guang ,shai shua chu FGFR1ji yin de qi dong zi huo xing he xin ou yu wei yu FGFR1ji yin shang you 202 bpzhi 509 bphe 794 bpzhi 1295 bpzhi jian 。li yong zai xian ruan jian JASPAR2018dui huo xing ou yu 794bpzhi 1295 bpnei jie ge de zhuai lu yin zi jin hang yu ce fa xian ,zai huo xing ou yu nei ju you duo ge yu xi bao fa yo xiang guan de zhuai lu yin zi jie ge wei dian ,ru Sp1、EGR1he KLF5deng zhuai lu yin zi 。2.qin chuan niu FGFR1ji yin he xin qi dong zi ou jia ji hua yan jiu wei le le jie qin chuan niu bu tong sheng chang shi ji ji rou zu zhi zhong FGFR1ji yin he xin qi dong zi ou shi fou cun zai cha yi jia ji hua ji ji dui mRNAbiao da liang de ying xiang 。yun yong ya liu suan qing yan ce xu PCRji shu jian ce qin chuan niu tai niu 、du niu he cheng nian niu san ge sheng chang shi ji ji rou zu zhi zhong FGFR1ji yin qi dong zi ou jia ji hua zhuang tai ,tong shi cai yong qPCRji shu jian ce qin chuan niu san ge bu tong sheng chang shi ji ji rou zu zhi zhong FGFR1ji yin mRNAde biao da shui ping 。qin chuan niu tai niu ji (0.595%)ji rou zu zhi zhong FGFR1ji yin qi dong zi ou jia ji hua shui ping xian zhe di yu du niu shi ji (2.14%)(P<0.05);qin chuan niu tai niu shi ji ji rou zu zhi zhong FGFR1ji yin mRNAbiao da shui ping xian zhe gao yu du niu shi ji (P<0.05)。yin ci ,zai qin chuan niu ji rou zu zhi zhong FGFR1ji yin qi dong zi ou cun zai cha yi jia ji hua ,bing ju qi dong zi ou de jia ji hua cheng du yue gao yue neng yi zhi FGFR1ji yin biao da 。3.FGFR1diao kong cheng ji xi bao zeng shi fen hua de yan jiu wei le yan jiu FGFR1ji yin dui niu cheng ji xi bao zeng shi fen hua de ying xiang ,li yong EdUji CCK-8shi ji he fa dui xi bao de zeng shi jin hang jian ce ,fa xian yu NCdui zhao zu xiang bi ,gan rao FGFR1ji yin hou xi bao shu mu xian zhe jian shao 。li yong liu shi xi bao shu dui xi bao zhou ji jin hang jian ce ,fa xian yu NCdui zhao zu xiang bi ,siFGFR1ji yin G1ji de xi bao shu xian zhe zeng jia ,Sji de xi bao shu xian zhe jian shao 。bing ju gan rao FGFR1hou ,dui zeng shi biao zhi ji yin de mRNAhe dan bai shui ping jin hang jian ce ,yu NCdui zhao zu xiang bi ,fa xian CylincD1,CDK2de biao da liang he dan bai liang xian zhe jiang di 。dui fen hua biao zhi ji yin de mRNAhe dan bai shui ping jin hang jian ce ,MyoDhe MyHCjun you sheng gao de qu shi ,dan bu xian zhe ,MyoGyou xia jiang de qu shi ,suo yi bu zu yi zheng ming ta dui fen hua de diao kong zuo yong 。yi shang jie guo biao ming ,FGFR1dui niu cheng ji xi bao zeng shi you xian zhe de cu jin zuo yong 。ben wen xiang xi tan jiu le FGFR1ji yin de zhuai lu diao kong ji ji dui niu cheng ji xi bao zeng shi fen hua de ying xiang ,wei hou xu rou niu ji rou fa yo xiang guan ji yin de yan jiu di gong le xin de sai lu he yan jiu ji chu ,dui yu jie shi zhong guo de fang huang niu ji rou fa yo de diao kong wang lao ,wei zhong guo zhuan men hua rou niu pin chong de pei yo di gong li lun zhi chi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北农林科技大学的程杰，发表于刊物西北农林科技大学2019-07-11论文，是一篇关于启动子活性论文,甲基化论文,牛成肌细胞增殖分化论文,转录调控机制论文,西北农林科技大学2019-07-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北农林科技大学2019-07-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：启动子活性论文; 甲基化论文; 牛成肌细胞增殖分化论文; 转录调控机制论文; 西北农林科技大学2019-07-11论文;