古尼虫草多糖的化学修饰与活性研究

论文摘要

古尼虫草多糖具有抗氧化、抗肿瘤、增强免疫力、抗衰老等生物活性。本文的研究目的在于通过硫酸酯化、羧甲基化等化学修饰提高其生物活性,为古尼虫草多糖的开发与应用提供更广阔的前景。本文以虫草菌丝粉为原料,通过水提醇沉法得到了古尼虫草多糖,分别命名为PS50和PS70。采用浓硫酸法对PS50和PS70进行了硫酸酯化修饰,产物SPS50、SPS70得率分别为62%和41%。采用一氯乙酸法对PS50和PS70进行了羧甲基化修饰,产物CPS50、CPS70得率分别为66%和54%。SPS50、CPS50通过凝胶色谱层析分离纯化,纯度分别达到97%和86%。明胶比浊法测得SPS50的硫酸根取代度约为0.33,酸洗法测得CPS50的羧甲基根取代度约为0.15。PS50、SPS50、CPS50的比旋光度值经测定分别为+28.33°、-36.75°、+12.5°。通过红外光谱、核磁共振、原子力显微镜、扫描电镜、GC-MS等初步分析了化学修饰产物SPS50、CPS50的结构。本文测定了SPS50、CPS50的体外抗氧化活性,结果表明,CPS50与PS50体外抗氧化能力相当,对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基均具有的清除能力。SPS50清除超氧阴离子自由基、羟基自由基的能力低于PS50,对DPPH自由基的清除能力与PS50相当。通过MTT法测定了古尼虫草多糖修饰前后的抗肿瘤活性,结果表明,PS50不具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,而SPS50具有一定的抑制K562肿瘤细胞增值作用,CPS50也具有一定的抑制K562肿瘤细胞增殖作用,但效果不显著。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 多糖
• 1.1.1 多糖的分类与结构
• 1.1.2 真菌多糖
• 1.1.3 虫草多糖
• 1.1.4 古尼虫草多糖
• 1.2 多糖的化学修饰
• 1.2.1 多糖的硫酸化修饰及方法
• 1.2.2 多糖的羧甲基化修饰
• 1.2.3 多糖的乙酰化修饰
• 1.2.4 其他方法对多糖进行修饰
• 1.3 多糖纯化及鉴定
• 1.3.1 多糖的纯化方法
• 1.3.2 多糖的纯度测定方法
• 1.3.3 多糖分子量的测定
• 1.3.4 多糖的理化性质鉴定
• 1.3.5 多糖的结构鉴定
• 1.4 研究目的与意义
• 1.5 研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验试剂及药品
• 2.1.2 试验仪器
• 2.1.3 培养基及试剂的制备
• 2.2 多糖的提取纯化
• 2.3 古尼虫草多糖化学修饰
• 2.3.1 古尼虫草多糖硫酸化修饰
• 2.3.2 古尼虫草多糖羧甲基化修饰
• 2.3.3 化学修饰多糖多糖得率计算
• 2.4 化学修饰古尼虫草多糖的分离纯化
• 2.5 化学修饰古尼虫草多糖理化性质的研究
• 2.5.1 化学修饰古尼草多糖取代度测定方法
• 2.5.2 化学修饰多糖比旋光度的测定
• 2.5.3 全波长扫描分析方法
• 2.6 化学修饰多糖的结构分析
• 2.6.1 化学修饰多糖红外光谱分析方法
• 2.6.2 化学修饰多糖高效凝胶渗透色谱分析方法
• 2.6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
• 2.6.4 扫描电镜图谱分析
• 2.6.5 原子力显微镜图谱分析
• 2.6.6 核磁共振图谱分析（HNMR,CNMR）
• 2.6.7 GC-MS图谱分析
• 2.7 化学修饰多糖活性研究
• 2.7.1 化学修饰多糖抗氧化活性研究
• 2.7.2 化学修饰古尼虫草多糖抗K562人白血病肿瘤细胞活性的研究
• 3 结果与讨论
• 3.1 古尼虫草多糖的化学修饰
• 3.1.1 古尼虫草多糖硫酸化修饰
• 3.1.2 古尼虫草多糖羧甲基化修饰
• 3.2 化学修饰古尼虫草多糖的分离纯化
• 3.2.1 硫酸化古尼虫草多糖的分离纯化
• 3.2.2 羧甲基化古尼虫草多糖的分离纯化
• 3.3 化学修饰多糖理化性质的分析
• 3.3.1 化学修饰多糖取代度的测定
• 3.3.2 化学修饰多糖比旋光度的测定
• 3.3.3 化学修饰多糖全波长扫描的分析
• 3.4 化学修饰古尼虫草多糖结构分析
• 3.4.1 化学修饰多糖红外图谱分析
• 3.4.2 化学修饰多糖高效凝胶渗透色谱分析
• 3.4.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
• 3.4.4 扫描电镜图谱分析
• 3.4.5 原子力显微镜图谱分析
• 3.4.6 化学修饰多糖核磁共振图谱分析
• 3.4.7 GC-MS图谱分析
• 3.5 化学修饰多糖抗氧化活性分析
• 2^-·活性的研究'>3.5.1 化学修饰多糖清除O₂^-·活性的研究
• 3.5.2 化学修饰多糖DPPH·自由基的清除能力
• 3.5.3 Fenton法评价化学修饰多糖·OH自由基清除能力
• 3.6 化学修饰多糖抗K562肿瘤细胞活性的研究
• 3.6.1 MTT法检测三种多糖对K562肿瘤细胞的增值抑制作用
• 3.6.2 SDS-PAGE检测与多糖培养K562肿瘤细胞中蛋白质变化
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 在读期间发表的论文目录
• 8 致谢