本文主要研究内容
作者王昊（2019）在《EHV-1多克隆抗体的制备及其皮层蛋白UL16的原核表达》一文中研究指出：马鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis,ER)是由马疱疹病毒 Ⅰ 型(Equine herpes virus type 1,EHV-1)和马疱疹病毒 Ⅳ 型(Equine herpesvirus type 4,EHV-4)引起的主要感染马属动物的高度接触性传染病。该病不仅可以表现不同程度的呼吸道症状,EHV-1还可以导致流产和致死的马脊髓性脑炎,给养马业带来严重的威胁。UL16蛋白为EHV-1的皮层蛋白之一,由ORF46编码,基因高度保守,在病毒复制和成熟过程中起重要作用。本实验的目的是制备EHV-1兔多克隆抗体,并通过原核表达系统获取体外表达的UL16蛋白。利用蔗糖梯度离心法将EHV-1 438/77株进行纯化,将纯化的病毒蛋白与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂进行乳化,分别对家兔进行首次免疫和加强免疫制备免疫血清;通过Westerm Blot检测显示,制备的EHV-1兔免疫血清中的多抗与EHV-1全病毒蛋白结合反应性良好。根据在GenBank上发表的ORF46基因的序列设计特异性引物,在引物末端引入EcoRI和XhoI两个酶切位点,通过PCR来扩增目的片段。纯化的PCR产物克隆到表达载体pET-32a,构建重组原核表达质粒pET-32a-UL16,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,鉴定阳性的重组菌分别以16℃和37℃、1mM的IPTG进行过夜诱导表达。SDS-PAGE结果显示,在59KD处出现与预期蛋白大小一致的条带。Western Blot鉴定结果显示,原核表达蛋白UL16可以与我们制备的EHV-1兔多克隆抗体有效的结合。本研究成功制备了抗原结合性良好的EHV-1兔多克隆抗体,并成功获得了具有良好反应原性的原核表达蛋白UL16。为EHV-1的UL16蛋白功能研究及新的诊断方法的建立提供研究基础。
Abstract
ma bi fei yan (Equine rhinopneumonitis,ER)shi you ma pao zhen bing du Ⅰ xing (Equine herpes virus type 1,EHV-1)he ma pao zhen bing du Ⅳ xing (Equine herpesvirus type 4,EHV-4)yin qi de zhu yao gan ran ma shu dong wu de gao du jie chu xing chuan ran bing 。gai bing bu jin ke yi biao xian bu tong cheng du de hu xi dao zheng zhuang ,EHV-1hai ke yi dao zhi liu chan he zhi si de ma ji sui xing nao yan ,gei yang ma ye dai lai yan chong de wei xie 。UL16dan bai wei EHV-1de pi ceng dan bai zhi yi ,you ORF46bian ma ,ji yin gao du bao shou ,zai bing du fu zhi he cheng shou guo cheng zhong qi chong yao zuo yong 。ben shi yan de mu de shi zhi bei EHV-1tu duo ke long kang ti ,bing tong guo yuan he biao da ji tong huo qu ti wai biao da de UL16dan bai 。li yong zhe tang ti du li xin fa jiang EHV-1 438/77zhu jin hang chun hua ,jiang chun hua de bing du dan bai yu fu shi wan quan zuo ji he fu shi bu wan quan zuo ji jin hang ru hua ,fen bie dui jia tu jin hang shou ci mian yi he jia jiang mian yi zhi bei mian yi xie qing ;tong guo Westerm Blotjian ce xian shi ,zhi bei de EHV-1tu mian yi xie qing zhong de duo kang yu EHV-1quan bing du dan bai jie ge fan ying xing liang hao 。gen ju zai GenBankshang fa biao de ORF46ji yin de xu lie she ji te yi xing yin wu ,zai yin wu mo duan yin ru EcoRIhe XhoIliang ge mei qie wei dian ,tong guo PCRlai kuo zeng mu de pian duan 。chun hua de PCRchan wu ke long dao biao da zai ti pET-32a,gou jian chong zu yuan he biao da zhi li pET-32a-UL16,zhuai hua da chang gan jun BL21(DE3)gan shou tai ,jian ding yang xing de chong zu jun fen bie yi 16℃he 37℃、1mMde IPTGjin hang guo ye you dao biao da 。SDS-PAGEjie guo xian shi ,zai 59KDchu chu xian yu yu ji dan bai da xiao yi zhi de tiao dai 。Western Blotjian ding jie guo xian shi ,yuan he biao da dan bai UL16ke yi yu wo men zhi bei de EHV-1tu duo ke long kang ti you xiao de jie ge 。ben yan jiu cheng gong zhi bei le kang yuan jie ge xing liang hao de EHV-1tu duo ke long kang ti ,bing cheng gong huo de le ju you liang hao fan ying yuan xing de yuan he biao da dan bai UL16。wei EHV-1de UL16dan bai gong neng yan jiu ji xin de zhen duan fang fa de jian li di gong yan jiu ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自内蒙古农业大学的王昊，发表于刊物内蒙古农业大学2019-10-08论文，是一篇关于马鼻肺炎论文,马疱疹病毒型论文,蛋白论文,多克隆抗体论文,原核表达论文,内蒙古农业大学2019-10-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自内蒙古农业大学2019-10-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：马鼻肺炎论文; 马疱疹病毒型论文; 蛋白论文; 多克隆抗体论文; 原核表达论文; 内蒙古农业大学2019-10-08论文;