导读:本文包含了高效分泌表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体,大肠杆菌,融合标签,分子伴侣
高效分泌表达论文文献综述
韩平[1]（2018）在《sTNFR1在大肠杆菌中的高效可溶性表达以及胞外分泌表达的初步研究》一文中研究指出肿瘤坏死因子(TNF-α)在体内大量释放会介导多种疾病的发生,它主要通过与细胞膜上受体(Ⅰ型和Ⅱ型)结合从而发挥其生理学活性。可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体(sTNFR1)是肿瘤坏死Ⅰ型受体(TNFR1)的胞外区域,它可以竞争性阻断TNFR1与TNF结合,降低TNF对细胞的毒性。因此,sTNFR1可以作为TNF-α的拮抗剂,联合TNF-α用于疾病的治疗,在医学领域具有重要的研究价值。本文即通过优化大肠杆菌表达系统,实现sTNFR1在大肠杆菌中的异源表达,获得较高纯度的sTNFR1蛋白,为研究sTNFR1的生理学活性、疾病治疗方面的应用及其作为药物蛋白未来实现低成本大量表达与制备奠定了良好基础。本文将人源sTNFR1基因克隆到pET-22b表达载体,成功构建了重组质粒pETH1,电转到大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌株中进行摇瓶发酵,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,目标蛋白全部以包涵体的形式存在于沉淀中。为了提高sTNFR1在大肠杆菌中的可溶性表达,首先,应用融合标签技术来提高sTNFR1可溶性表达,选择了DsbC、MBP、TrxA和NusA四种在大肠杆菌中适用的融合标签,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,相较于其它叁个标签,在sTNFR1的N端融合NusA标签效果最好,使sTNFR1的可溶性表达量提高了20%。其次,为了进一步促进sTNFR1可溶性表达,在NusA-sTNFR1的基础上,共表达了七种胞内的分子伴侣质粒以及酵母二硫键从头合成体系中的巯基氧化酶Erv1来辅助sTNFR1蛋白正确折迭,筛选出tig分子伴侣对sTNFR1蛋白可溶性表达有明显的促进作用,使sTNFR1在大肠杆菌中的可溶性表达可以达90%。对EC12菌株进行摇瓶发酵,从诱导温度和IPTG诱导浓度两方面对发酵条件进行初步优化,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,诱导温度为25oC,IPTG终浓度为0.5 mM,TB作为发酵培养基时,sTNFR1蛋白总体以及胞内可溶性表达水平最高。最后,对可溶性蛋白进行Ni-NTA亲和层析纯化后,TEV蛋白酶酶切去除N端的NusA标签,并结合Western Blot分析鉴定,证实表达产物即为sTNFR1蛋白并获得较高纯度的sTNFR1蛋白。综合前期研究结果进一步优化表达系统,初步研究sTNFR1蛋白在大肠杆菌中的胞外分泌表达。首先,筛选合适的信号肽,构建分别带有OmpA、LamB、DsbA、TorT和phoA五种信号肽的工程菌株,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,信号肽TorT可引导sTNFR1分泌到胞外,但分泌量较低。为了提高sTNFR1胞外分泌量,分析其分泌瓶颈可能是因为目标蛋白无法跨越细胞膜,导致蛋白分泌受阻,因此,分别共表达了磷脂酶C和角质酶增加细胞膜的通透性,从而促进蛋白外排。结果显示,胞外分泌量未有明显增加,后续需进一步分析其分泌瓶颈。(本文来源于《大连工业大学》期刊2018-06-01）
郝荣华,张晓元,王羽,刘飞,陈勉[2]（2018）在《耐热耐碱木聚糖酶在大肠杆菌中的高效分泌表达及酶学性质研究》一文中研究指出目的研究枯草芽孢杆菌来源的木聚糖酶基因在大肠杆菌BL2l中的高效分泌表达并对其产木聚糖酶进行酶学性质分析。方法全基因合成枯草芽孢杆菌木聚糖酶基因序列并进行密码子优化,经大肠杆菌BL2l表达后获得基因工程菌株,通过SDS-PAGE电泳检测、硫酸铵分级沉淀和AKTA系统分离纯化,分析表达产物的酶学性质。结果重组木聚糖酶为胞外分泌性表达,相对分子质量约43×103;酶促反应最适温度为65℃,最适p H为10.0,最适条件下酶活最高可达1201.5 IU/ml。结论成功获得高效分泌表达重组木聚糖酶的基因工程菌株,该木聚糖酶具较好的耐热性和耐碱性。(本文来源于《食品与药品》期刊2018年03期）
李巧玲[3]（2018）在《抗VEGF抗体片段Fab在大肠杆菌中的高效分泌表达》一文中研究指出目前,抗体片段Fab在治疗人类多种疾病(如癌症、病毒感染、炎症等)方面起着重要作用。由于其缺少糖基化的Fc区,因此并不需要进行糖基化修饰。此结构特点使得Fab可在大肠杆菌中进行活性表达。Escherichia coli作为宿主菌株的突出优势在于低成本、生长快、易控制,在短时间内可以获得高产量,因此,已逐渐成为生产抗体的中坚力量。但是,在E.coli中生产抗体片段Fab的主要限制因素在于Fab的产量较低,原因主要是Fab易在胞质中错误折迭、聚集,形成无生物学活性的包涵体,且宿主菌中含有多种蛋白酶,对Fab有一定的降解作用等。因此,为提高抗体产量,可以从表达载体、宿主菌株、分子伴侣及折迭酶等几个方面着手,以期达到理想目标。本课题从叁方面对Fab的表达进行了优化:1)在实验室前期工作基础上,以E.coli DH11 T7为宿主菌株,通过构建不同的Fab表达载体,最终提高Fab在E.coli中的产量;2)在1)工作的基础上,通过共表达多种分子伴侣,进一步提高Fab在E.coli中的产量;3)在E.coli周质蛋白酶缺陷菌株DHll-ptr-degp(以下简称86D)的基础上,对其基因组上spr(extragenic suppressor,抑制prc基因缺陷造成的菌体过早裂解)基因H145A位进行单个氨基酸突变,获得突变菌株86D-Mspr,同时共表达优势Fab表达载体及分子伴侣,最终通过发酵实验,提高Fab在E.coli中的产量。对于Fab表达载体的构建,主要对信号肽进行优化。尤其是重链信号肽DsbA及STII,通过改变信号肽翻译起始区(translation initiation region,TIR)强度,将获得的13个重链片段分别与PelB-LC连接至pET-3b载体骨架,经ELISA分析获得了Fab最优表达载体的组合DsbA8+HC +Pe1B+LC(pET-DH8PL),总产量约14 mg/L左右。通过进一步构建单一分子伴侣表达载体及多个分子伴侣表达载体,能够在一定程度上改善Fab在E.coli中的分泌表达,尤其当以p15c-FkpA-SurA组合时,Fab产量可达到20mg几左右,产量提高了30%。将宿主菌株由E.coliDH11 T7替换为E.E.coli周质蛋白酶缺陷菌株86D时,抗体片段Fab的产量可提高20%左右。E.coli属于原核表达系统,其发酵工艺相对简单,对表达宿主的大规模培养是为了获得大批量的抗体蛋白。本课题在实验室所构建的Red无痕敲除法的基础上,用类似的方法完成了对E.coli 86DsprH145A单个氨基酸的突变,获得了基因组突变菌株86D-Mspr。第一步,将构建的供体质粒p15AD2IC-Mspr-SacB与辅助质粒pAAICDGBE共转入E.coli 86D中,在L-阿拉伯糖的作用下,诱导表达I-CreI核酸内切酶和Red重组酶。I-CreI酶切割供体质粒上的左右同源臂及Cm抗性基因,并在Red重组酶的作用下,进行同源重组,最终在E.coli 86D基因组上成功整合Cm抗性基因。第二步,将辅助质粒SN3K转化至第一步含Cm抗性基因的E.coli 86D中,同样在L-阿拉伯糖作用下,诱导表达I-SceI核酸内切酶和Red重组酶。在I-SceI酶作用下,将基因组上的Is-Cm片段切除,同样在Red重组酶的作用下,左右同源臂与染色体发生同源重组,从而获得基因组突变菌株86D-Mspr。最终对其进行初步发酵工艺研究,在3 L发酵罐中抗体片段Fab的产量可达到72 mg/L左右。本工作为进一步提高抗体Fab产量打下了基础。(本文来源于《安徽大学》期刊2018-05-01）
张欢欢,陈昶旭,刘中美,周哲敏[4]（2018）在《雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达》一文中研究指出分别构建以2种启动子表达雅致放射毛霉羧肽酶Y的重组毕赤酵母菌株GS115,通过提高抗生素浓度筛选到具有不同拷贝数羧肽酶Y基因的重组菌株,通过对蛋白表达量的比较筛选出高效分泌表达菌株。在筛选得到的重组菌株中共表达伴侣蛋白binding protein(BIP)、protein disulfide isomerase(PDI)、endoplasmic oxidoreductin 1(ERO1),分别将羧肽酶Y酶原的分泌表达量提高到1. 87倍、1. 72倍和1. 26倍。体外羧肽酶Y酶原可以由胰蛋白酶激活。该研究实现了雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达,为其工业化应用提供了技术支持。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2018年11期）
张炜炜[5]（2018）在《纤维素酶系在枯草芽孢杆菌中的分泌表达及高效协同作用的研究》一文中研究指出近年来,畜牧行业发展迅速,导致饲料资源越来越匮乏,人畜争粮问题越来越严重,饲料资源已成为阻碍养殖业持续健康发展的一个重大问题。然而有一类主要成分为木质纤维素的农作物副产品资源十分丰富,但是这类含有木质纤维素的植物,因其细胞壁难以降解,造成了自然界中大量的纤维素资源没有在畜牧行业中得到广泛应用,甚至造成环境污染。将木质纤维素分解为可以被消化吸收的营养成分,依赖于纤维素酶系对底物的协同降解。本论文围绕产纤维素酶芽孢杆菌的筛选,纤维素酶基因的克隆,枯草芽孢杆菌信号肽的系统性筛选,纤维素内切酶、纤维素外切酶和木聚糖酶的分泌表达,以及多酶协同与多酶复合体协同降解天然纤维素效果进行了研究。结果如下:1采用刚果红染色法从腐殖质中分离获得一株产纤维素酶的芽孢杆菌(Bacillus sp),经革兰氏染色和16s rDNA序列比对分析,分离获得的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),将其命名为B.subtili ZC-5。B.subtili ZC-5培养24 h产酶活性最高达到3.22U/mL。B.subtili ZC-5的纤维素酶的最适反应温度为50℃-60℃,最适pH为pH6-pH7。该酶不耐受高温。不同纤维来源对B.subtili ZC-5产纤维素酶活力有影响,培养基中添加燕麦青干草时B.subtili ZC-5纤维素酶活最高(4.21U/mL)。2从B.subtili ZC-5基因组DNA中克隆获得纤维素内切酶基因cen ZC-5。cen ZC-5全长1.5 kb,编码55个氨基酸,其编码蛋白的N端30个氨基酸为信号肽。cen ZC-5的序列与Bacillus subtilis纤维素内切酶基因序列的相似性达到94%,cen ZC-5编码蛋白与Bacillus subtilis的纤维素内切酶具有很高的相似性。在大肠杆菌中进行cen ZC-5原核表达,验证了该基因编码蛋白的纤维素酶活性。3构建了E.coli-B.subtilis穿梭质粒载体pCBS。基于pCBS和木聚糖酶基因xynBYG,分别构建获得信号肽筛选载体pP43-xynBYG和pPglvm-xynBYG。从B.subtilis1A747基因组中扩增获得138个信号肽编码基因,获得114个信号肽筛选表达载体pGS-pGS 114、114个信号肽筛选表达载体pP43S1-pP43S114、24个信号肽筛选表达载体pGT1-pGT24和24个信号肽筛选表达载体pP43T1-pP43T24。以B.subtilis WB700为宿主进行276个信号肽介导的分泌表达检测。结果显示,信号肽Sec途径信号肽PhoB、YhfM,YpjP和CotC展现了高分泌表达水平,木聚糖酶酶活高于150 U/mL。含Tat途径信号肽的分泌表达重组菌中,信号肽LipA的酶活最高,大部分Tat途径信号肽的酶活低于0.1 U/mL。4对信号肽的氨基酸残基性质和相应分泌表达量进行分析。结果显示,氨基酸疏水性、螺旋倾向性指数、螺旋含量指数、侧链θ角度指数、螺旋稳定性指数、氨基酸残基跨膜指数、双氨基酸残基转角倾向指数和信号肽D-score等指标和分泌表达量呈强相关性。LPS分析显示,7个氨基酸指数和信号肽D-score对分泌表达量变异的贡献率为23%,其中螺旋倾向性指数,氨基酸残基跨膜指数和D-score是3个重要的独立变量。采用同样的分析方法分析这8个变量(7个氨基酸指数和信号肽D-score)和角质酶分泌表达的关系。结果显示,这8个变量对角质酶分泌表达量变异的贡献率为18%,氨基酸残基跨膜指数和D-score是2个重要的独立变量。PLS预测的模型和木聚糖酶表达量的测定值之间具有强相关性(PCC=0.54)。5构建了含自身信号肽的cen ZC-5分泌表达载体pCEN,phoB介导的cen ZC-5分泌表达载体pPhoB-CEN。合成Clostridium thermocellum多酶复合体中纤维素酶组分的锚定域蛋白(Dockerin)的编码基因Ctdoc,构建3’端嵌合Ctdoccen的重组基因cenZC-5doc,并构建了cenZC-5doc分泌表达载体pCENdoc。分泌表达检测显示,在12h、24h、36h和48h,B.subtilis WB700(pPhoB-CEN)的分泌表达水平依次是WB700(pCEN)的1.56、1.44、1.37和1.25倍。B.subtilis WB700(pCendoc)在24h和36h的分泌表达水平依次是B.subtilis WB700(pPhoB-CEN)的84.68%和8427%。6合成嵌合了Clostridium cellulolyticum纤维素Dockerin的编码基因Ccdoc的重组纤维素外切酶cbhAdoc,并构建分泌表达载体pCBdoc。构建嵌合了Rumincoccus flavefaciens Dockerin的编码基因Rfdoc的重组木聚糖酶xyn BYGdoc,并构建分泌表达载体pXYNdoc。设计合成含Clostridium thermocellum纤维素结合域(CBM)和粘附域(Cohesin),Clostridium cellulolyticum Cohesin和Rumincoccus flavefaciens Cohesin的脚手架蛋白(Scaffoldin)基因scafCCR,并构建分泌表达载体pScaf。分泌表达检测显示,cbhAdoc在B.subtilis WB700中的分泌表达水平在24h达到最大为1.59U/mL。重组木聚糖酶Xyn BYGdoc在24h的分泌表达水平达到最大为302.11U/mL。在24h和48h,重组木聚糖酶(xyn BYGdoc)的分泌表达量为木聚糖酶(xyn BYG)的81.56%和76.24%。7为检测不同酶协同降解效果,采用B.subtilis WB700分泌表达的CenZC-5doc和CbhAdoc共同处理燕麦青干草时,在24h、48h和72h还原糖的产量均高于CenZC-5doc或CbhAdoc单独处理燕麦青干草。采用B.subtilis WB700分泌表达CenZC-5doc、CbhAdoc和Xyn BYGdoc共同降解燕麦青干草2h、48h和72h,还原糖的产量显着的高于CenZC-5doc和CbhAdoc共同降解燕麦青干草的还原糖产量。CenZC-5doc、CbhAdoc和Xyn BYGdoc共同降解24h、48h和72h的还原糖的产量分别是是CenZC-5doc和CbhAdoc双酶共同降解的1.38倍、1.42倍和1.17倍。纯化B.subtilis WB700分泌表达CenZC-5doc,CbhAdoc,Xyn BYGdoc和ScafCCR,在体外孵育组装多酶复合体,多酶复合体降解燕麦青干草产生的还原糖量在24h、48h和72h均高于CenZC-5doc、CbhAdoc和Xyn BYGdoc的3酶混合物共同降解产生的还原糖量。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-04-01）
郭鹏飞,韩元,刘军龙,刘爱红,王锦明[6]（2018）在《吕氏泰勒虫TlSP基因多态性免疫区在毕赤酵母中的高效分泌表达》一文中研究指出为研制具有完整抗原性和天然结构的吕氏泰勒虫表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein),采用RT-PCR方法从吕氏泰勒虫裂殖子总RNA反转录获得TlSP基因的c DNA序列,将其多态性免疫区域克隆至毕赤酵母表达载体p PIC9K,构建重组质粒p PIC9K-TlSP。p PIC9K-TlSP经SalⅠ酶切线性化后,电转化导入毕赤酵母菌株GS115和KM71中,经遗传霉素G-418筛选后得到高拷贝菌株,对PCR鉴定为阳性的菌株进行甲醇诱导表达。对GS115和KM71两种菌株表达重组蛋白TlSP的效果进行评估,并对TlSP的反应原性进行了分析。结果表明,反转录获得的TlSP基因的c DNA序列长为888 bp,其中多态性免疫区域长为552 bp;筛选得到抗遗传霉素G-418(4.0 mg/m L)的GS115菌株5株,KM71菌株7株,经PCR鉴定为阳性的2种菌株均成功表达了分泌型重组蛋白TlSP,GS115菌株的蛋白表达效果较好;重组蛋白TlSP能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、绵羊无浆体阳性血清无反应。本研究为深入研究TlSP蛋白在羊泰勒虫病免疫学诊断和亚单位疫苗中的应用奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2018年02期）
袁林,曾静,郭建军,郭浩,杨罡[7]（2018）在《极端嗜热酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达》一文中研究指出为探索极端嗜热酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WB600)中的高效分泌表达条件,对来源于枯草芽孢杆菌的9种Sec分泌途径信号肽进行筛选,结果显示信号肽Yfk N的引导分泌效率最高。在此基础上,为进一步优化PFA的分泌表达,对信号肽Yfk N的Ile3和Gln4进行饱和突变,并比较不同突变体的引导分泌效率。结果表明突变体I3G/Q4R的引导分泌效率最高,重组枯草芽孢杆菌的胞外α-淀粉酶活力高达715 U/m L。重组α-淀粉酶PFA的最适反应p H值为5.0,最适反应温度为100℃,于100℃的半衰期长达13 h,并且不依赖于Ca~(2+)。结果表明,采用信号肽I3G/Q4R,极端嗜热酸性α-淀粉酶PFA能够在枯草芽孢杆菌中高效分泌表达,这有利于其在淀粉液化工艺中的应用。(本文来源于《食品科学》期刊2018年18期）
李志敏,潘兴亮,杨雅麟,刘智,徐俐[8]（2017）在《溶解性多糖单加氧酶CBP21的高效分泌表达及与几丁质酶的协同作用研究》一文中研究指出为实现溶解性多糖单加氧酶CBP21在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达,并对其与几丁质酶的协同作用进行研究,以大肠-枯草芽孢杆菌穿梭质粒p WB980为基本骨架,溶解性多糖单加氧酶为目的蛋白,构建了信号肽筛选载体,依据信号肽结构特征(正电荷与疏水性的差异)对Sec途径的13个信号肽进行了筛选,结果显示信号肽Ylq B引导分泌溶解性多糖单加氧酶的效率最高,其发酵液上清对胶体几丁质结合活力最高,上清中结合蛋白占总蛋白浓度为32.39%。进一步分别对CBP21和来自糖苷水解酶18家族粘质沙雷菌几丁质酶及来自糖苷水解酶19家族的嗜水气单胞菌几丁质酶Chi92的协同作用进行分析,表明CBP21对几丁质酶和Chi92活力均有促进作用,其中使粘质沙雷菌几丁质酶活力提高1.85倍,使Chi92(嗜水气单胞菌)活力提高2.35倍。上述研究为该溶解性多糖单加氧酶的工业应用奠定了基础。(本文来源于《中国农业科技导报》期刊2017年01期）
梁果义,甘一迪,刘晓航,蔡祥胜[9]（2016）在《重组胰岛素原在毕赤酵母中高效分泌表达的研究》一文中研究指出为了提高胰岛素在酵母的分泌表达效率,首先合成了胰岛素原基因,并在其序列的N端引入了一段引导肽,构建成p PICZα-A-Pro-INS重组分泌型表达载体。将表达载体线性化处理后电击转化毕赤酵母GSll5感受态细胞,筛选获得分泌型高表达工程菌株,重组蛋白的表达水平为300 mg/L,占分泌总蛋白的40%左右。该结果表达明引导肽的存在对于在毕赤酵母中高效表达胰岛素的基因至关重要。(本文来源于《生物技术通报》期刊2016年06期）
葛春蕾[10]（2016）在《高效分泌表达纳豆激酶的重组枯草芽孢杆菌的构建》一文中研究指出血栓是导致中老年人心肌梗塞、中风等心脑血管疾病的主要原因之一,血栓疾病已经严重威胁到人类的健康。因此寻找和开发安全可靠、无副作用的溶栓药物具有重要意义。纳豆激酶(Nattokinase,NK,EC 3.4.21.62)因其特有的强溶栓作用被认为是最有潜力的新型溶栓试剂。但产酶量低严重影响了纳豆激酶的生产和应用,因此本文重点研究如何提高纳豆激酶表达量。本论文首先研究了六种不同启动子对纳豆激酶在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中表达的影响,并对启动子进行了不同形式的串联操作,构建了B.subtilis纳豆激酶高效表达载体。之后初步优化了培养基组分,将选出来效果最好的重组菌进行了5 L罐发酵实验以及纳豆固态发酵实验,并与市售纳豆菌粉的产酶能力进行了比较。具体研究结果如下:(1)六种启动子介导的纳豆激酶分泌表达实验结果显示,重组菌B.subtilis WB800/pSG102(PP43)的纳豆激酶酶活最高,且在36 h达到最高值140.5 FU·m L-1。重组菌B.subtilis WB800/pSG101(PHpaII)和B.subtilis WB800/pSG103(PBcaprE)的表达水平次之,分别为110.8 FU·m L-1和100.8 FU·mL-1。(2)本研究对启动子进行了两种不同形式地串联:(a)将启动子进行整体多次串联,成功构建重组菌B.subtilis WB800/pBG107-B.subtilis WB800/pBG128,并对其进行发酵表达。酶活数据显示,重组菌B.subtilis WB800/pSG121(PHpaII-PHpa II-PP43)的纳豆激酶表达水平最高,36 h达到最高值264.2 FU·m L-1;(b)对启动子核心区序列进行多次串联操作,成功构建质粒pSG131-pSG137。酶活数据及SDS-PAGE分析结果显示,重组菌B.subtilis WB800/136(5CPP43)的纳豆激酶表达水平最高,36 h达到最高值258.0 FU·m L-1。(3)分别从种龄、培养基组分(碳源、氮源、碳氮比)对重组菌B.subtilis WB800/pSG121(PHpaII-PHpaII-PP43)进行摇瓶发酵优化,确定发酵条件为:种龄8-15 h;最佳的碳源和氮源分别是甘油和大豆蛋白胨;最佳碳氮比为1:1。采用此发酵条件进行5 L罐发酵实验,重组菌纳豆激酶表达量为820.0 FU·m L-1。(4)对重组菌B.subtilis WB800/pSG121(PHpaII-PHpaII-PP43)进行干菌粉初步摸索实验,确定了每100 g黄豆干菌粉的最适添加量为5.7 mg。在相同条件下与市售纳豆菌粉一起发酵生产纳豆,比较各菌株的产酶能力,结果显示:本文中构建的菌株产纳豆激酶能力更强。(本文来源于《江南大学》期刊2016-06-01）
高效分泌表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究枯草芽孢杆菌来源的木聚糖酶基因在大肠杆菌BL2l中的高效分泌表达并对其产木聚糖酶进行酶学性质分析。方法全基因合成枯草芽孢杆菌木聚糖酶基因序列并进行密码子优化,经大肠杆菌BL2l表达后获得基因工程菌株,通过SDS-PAGE电泳检测、硫酸铵分级沉淀和AKTA系统分离纯化,分析表达产物的酶学性质。结果重组木聚糖酶为胞外分泌性表达,相对分子质量约43×103;酶促反应最适温度为65℃,最适p H为10.0,最适条件下酶活最高可达1201.5 IU/ml。结论成功获得高效分泌表达重组木聚糖酶的基因工程菌株,该木聚糖酶具较好的耐热性和耐碱性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
高效分泌表达论文参考文献
[1].韩平.sTNFR1在大肠杆菌中的高效可溶性表达以及胞外分泌表达的初步研究[D].大连工业大学.2018
[2].郝荣华,张晓元,王羽,刘飞,陈勉.耐热耐碱木聚糖酶在大肠杆菌中的高效分泌表达及酶学性质研究[J].食品与药品.2018
[3].李巧玲.抗VEGF抗体片段Fab在大肠杆菌中的高效分泌表达[D].安徽大学.2018
[4].张欢欢,陈昶旭,刘中美,周哲敏.雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达[J].食品与发酵工业.2018
[5].张炜炜.纤维素酶系在枯草芽孢杆菌中的分泌表达及高效协同作用的研究[D].西北农林科技大学.2018
[6].郭鹏飞,韩元,刘军龙,刘爱红,王锦明.吕氏泰勒虫TlSP基因多态性免疫区在毕赤酵母中的高效分泌表达[J].中国兽医科学.2018
[7].袁林,曾静,郭建军,郭浩,杨罡.极端嗜热酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达[J].食品科学.2018
[8].李志敏,潘兴亮,杨雅麟,刘智,徐俐.溶解性多糖单加氧酶CBP21的高效分泌表达及与几丁质酶的协同作用研究[J].中国农业科技导报.2017
[9].梁果义,甘一迪,刘晓航,蔡祥胜.重组胰岛素原在毕赤酵母中高效分泌表达的研究[J].生物技术通报.2016
[10].葛春蕾.高效分泌表达纳豆激酶的重组枯草芽孢杆菌的构建[D].江南大学.2016
标签：可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体; 大肠杆菌; 融合标签; 分子伴侣;