论文摘要
鲢（Hypophthalmichthys molitrix）属于鲤形目，鲤科，鲢亚科，在淡水养殖业中占有重要的经济地位。目前对鲢的基础免疫学研究报道较少，为了探讨鲢的免疫防御机理，我们采用RT-PCR和RACE-PCR技术，克隆了鲢免疫相关因子IL-8全长cDNA序列，TNF、CXCR1、CXCR2和HSP70 cDNA核心片段，并推测得到其相应氨基酸序列。同时将得到的氨基酸序列分别与其它动物相应的氨基酸序列进行同源性比较，并通过MEGA4软件以邻接法构建系统进化树，从分子生物学角度研究鲢与其它动物的亲缘远近关系。序列分析结果表明，鲢IL-8 cDNA全序列长679bp，开放阅读框长297bp，编码98个氨基酸，含有CXC亚家族标签序列和ELR特征序列；鲢TNF cDNA核心片段长860bp，编码153个氨基酸，包含一个TNF家族标签序列、TNF2家族分布文件、构成二硫键的两个保守半胱氨酸和两个TNF-a基因特有的内毒素应答序列（TTATTTAT）；鲢CXCR1 cDNA核心片段646bp，编码55个氨基酸；鲢CXCR2 cDNA核心片段481bp，编码150个氨基酸；鲢HSP70 cDNA核心片段长988bp，编码329个氨基酸，含有一个HSP70家族标签序列。进化分析结果表明，鲢IL-8处于鱼类CXCa型分枝中，为CXCa型趋化因子，与鲤形目鲤鱼（Cyprinus carpio）进化亲缘关系最近，与鲑形目虹鳟（Oncorhynchus mykiss）IL-8具有较近的进化亲缘关系，而与鲽形目褐牙鲆（Paralichthys olivaceus）、牙鲆（Paralichthys olivaceus），鲀形目红鳍东方鲀（Takifugu Rubripes），鳕形目黑线鳕（Melanogrammus Aeglefinus）、大西洋鳕（Gadus morhua）具有较远的进化亲缘关系；鲢TNF为a型TNF，与鲤形目鲤鱼亲缘关系最近，与鲶形目斑点叉尾鮰（Ictalurus punctatus）亲缘关系较近，而与鲽形目褐牙鲆，鲈型目金头鯛（Sparus aurata）、真鲷（Pagrus major）关系较远；鲢HSP70与鲤形目鲤鱼、金鱼、斑马鱼亲缘关系最近，而与鲀形目红鳍东方鲀、鲈形目舌齿鲈（Dicentrarchus labrax）、黄锡鯛（Rhabdosargus sarba）、鲽形目牙鲆亲缘关系较远。RT-PCR结果表明鲢IL-8主要在胰、肝脏和头肾中表达，肠和鳃中有少量表达，而在肌肉和脑中几乎没有表达。