论文摘要
背景和目的系膜细胞增殖和细胞外基质积聚是许多类型肾小球疾病的共同特征。继发于系膜细胞增殖和细胞外基质（ECM）积聚的肾小球硬化及肾间质纤维化是慢性肾脏病（CKD）进展的重要原因。anti-Thy1肾炎模型是模拟人类肾小球疾病建立的以anti-Thy1抗原单克隆抗体诱导的实验性系膜增殖性肾小球肾炎动物模型，其病理特征为：系膜细胞增殖及细胞外基质积聚。该模型为评估新药对系膜增殖的影响提供了最佳选择。研究表明，细胞增殖的调节最终发生在细胞周期水平，而细胞周期又受一系列的细胞周期调控蛋白调控。咪唑立宾是一种新型免疫抑制剂，可通过抑制IMPDH及GMP合成酶，从而特异地抑制T、B淋巴细胞的增殖。对于非免疫性异常增殖的系膜细胞是否也有抗增殖作用尚不清楚。目前本实验室体外研究发现咪唑立宾能够抑制系膜细胞增殖，下调细胞周期正调控蛋白（cyclins，CDK）的表达，上调细胞周期负调控蛋白（CKI）的表达。体内是否也具有相似的作用尚未有研究。我们成功制备了急性anti-Thy1肾炎大鼠模型，观察咪唑立宾对系膜细胞增殖的影响，并进一步探讨其可能的作用机制。方法雄性Wistar大鼠150只，随机分为以下五组：（1）正常对照组（groupC）；（2）anti-Thy1肾炎模型组（groupT）；（3）MZ治疗组（groupM）；（4）科素亚治疗组（groupL）；（5）MZ+科素亚治疗组（groupM+L）。每组30只，每组每个时间点5只。模型组及治疗组尾静脉注射OX-7细胞上清浓缩液（1.5ml／kg相当于蛋白100mg／kg）；正常组注射生理盐水。造模后6小时开始灌胃给药，连续给药6天。以上各组大鼠分别给予生理盐水、生理盐水、MZ（20mg/kg/d）、科素亚（200mg/kg/d）、MZ（20mg/kg/d）+科素亚（200mg/kg/d）。于造模后第1、2、3、4、5、7天分别处死各组大鼠留取肾组织标本，处死前一天腹膜内注射Brdu（100mg/kg，3次/日），第7天处死前留取24小时尿液和血清标本用于检测24小时尿蛋白、血尿素氮、肌酐水平；双侧肾组织用于组织学及RT-PCR及Western blot分析。结果1．24h尿蛋白定量和SCr、BUN：与正常对照组相比，模型组24h尿蛋白定量显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，咪唑立宾或科素亚均可降低24h尿蛋白，且咪唑立宾或联合用药的作用显著优于单独应用科素亚的作用（P＜0.05）。每个时间点内，各组大鼠之间SCr、BUN含量均无显著性差异（P＞0.05）。2．肾脏组织形态学变化：与正常对照组相比，模型组肾小球内系膜细胞数明显增加，ECM积聚增多（P＜0.05）；与模型组相比，咪唑立宾或科素亚均可减少肾小球内的系膜细胞数和ECM积聚，且咪唑立宾或联合用药的作用显著优于单独应用科素亚的作用（P＜0.05）。3．RT-PCR：与正常组相比，模型组cyclin D1、cyclinA的mRNA表达显著上调（P＜0.05）；咪唑立宾或科素亚均可显著下调其表达，且咪唑立宾或联合用药的作用显著优于单独应用科素亚的作用（P＜0.05）。P27的mRNA表达水平各个时间点各组之间无显著性差异（P＞0.05）。4．Western bolt：与正常组相比，模型组cyclin D1、cyclin A、P21及CDK2的蛋白表达显著上调，P27的蛋白表达显著下调（P＜0.05）；咪唑立宾或科素亚均可显著下调cyclin D1、cyclin A、P21及CDK2的表达，上调P27的蛋白表达，且咪唑立宾或联合用药的作用显著优于单独应用科素亚的作用（P＜0.05）。5．免疫荧光：Brdu标记显示正常组大鼠几乎没有Brdu阳性细胞。与正常组相比，模型组Brdu阳性细胞数显著增加，咪唑立宾或科素亚均可显著减少其表达（P＜0.05）。与正常组相比，模型组cyclin D1、cyclin A及CDK2的阳性细胞数显著增加，P27阳性细胞数显著减少（P＜0.05）；与模型组相比，咪唑立宾或科素亚均可显著减少cyclin D1、cyclin A及CDK2的阳性细胞数，增加P27阳性细胞数（P＜0.05）。小结1．MZ与科素亚可抑制急性anti-Thy1肾炎大鼠系膜细胞增殖，减少尿蛋白。2．MZ对系膜细胞增殖的抑制作用至少部分是通过下调cyclinD1、cyclinA、CDK2、p21的表达，上调P27的表达实现的。
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标签：肾炎论文; 系膜细胞论文; 增殖论文; 细胞周期调控蛋白论文;