藏茵陈活性成分的结构修饰及生物活性研究

论文摘要

藏茵陈是一种传统藏药,具有保肝、抗炎、抗氧化损伤等多种生物活性。该药主要含有环烯醚萜、口山酮和三萜类成分。近些年,其所含环烯醚萜类和口山酮类成分逐渐成为研究热点。但这类成分普遍存在活性不高或不易吸收等不足之处。本文旨在通过生物学方法对藏茵陈所含主要成分进行修饰,以期获得具有一定活性的化合物。主要工作如下：以獐牙菜苦苷、当药醇苷的平均转移率为评价指标,通过正交试验对药材中含有的这两种化合物的提取工艺进行优化,并利用大孔树脂、硅胶等分离手段进行纯化,使其纯度达到80%以上。考察黑曲霉菌对獐牙菜苦苷、当药醇苷的转化作用。采用獐牙菜苦苷与黑曲霉菌共同孵育,并获取了（5Z）-5-乙叉基-8-羟基-3,4,5,6,7,8-六氢-1H-吡喃[3,4-c]嘧啶-1-酮（EHPO）,獐牙菜苷等产物。经考察,确定了适于EHPO生成的培养基为：葡萄糖5g／L,蛋白胨7.5g/L, KH2PO4 5g/L, MgSO4 1.2g/L, MnSO4 1.51 g/L, NaCl 0.59 g/L,初始pH值为6.0。以转移率为主要指标确立了EHPO的制备工艺条件为：经石油醚（60-90℃）脱脂后,采用HPD-300型树脂纯化：依次采用水（3BV）,10%乙醇（3BV）除杂,再用50%乙醇洗脱3BV。50%乙醇洗脱部分经Al2O3柱层析进一步纯化。依次采用乙酸乙酯-甲醇8：2溶液（9BV）,乙酸乙酯-甲醇6：4溶液（4BV）,乙酸乙酯-甲醇2：8溶液（12BV）洗脱。再经制备液相精制,可得到产物EHPO,并回收部分獐牙菜苦苷（纯度>95%）。采用Caco-2细胞模型进行的体外吸收试验表明：给予不同剂量的EHPO后,在Caco-2细胞模型中的转运中对应时间点的表观渗透系数值PappAP-BL约等于PappBL-AP.在所测浓度范围内转化产物的Papp值基本保持恒定。在Caco-2细胞模型中,EHPO的渗透性较好,以被动扩散为主的方式跨膜转运,但pH值、维拉帕米对其跨膜转运仍有一定的影响。通过大鼠肝匀浆脂质过氧化模型的研究结果表明：EHPO具有一定的体外抗氧化作用；在羟自由基致红细胞溶血模型中,0.8mg/mL的EHPO可显著性抑制羟自由基致氧化损伤。四氯化碳致小鼠急性肝损伤试验结果表明：EHPO能显著性降低小鼠血清ALT、AST水平,减少MDA含量,增强SOD活力（P<0.05）,对四氯化碳引起的肝细胞损伤有一定的保护作用。总之,上述研究结果表明：藏茵陈所含主要化合物——獐牙菜苦苷、当药醇苷均可被黑曲霉菌降解转化。通过本文建立的分离、纯化工艺可有效的分离、制备前体化合物以及产物。初步研究结果表明,獐牙菜苦苷与黑曲霉菌共同孵育获得的化合物EHPO易于吸收,具有一定的抗氧化,保肝活性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、意义
• 一、藏茵陈有效成分的制备工艺研究
• 概述
• 1.1 仪器与试剂
• 1.2 方法与结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 二、黑曲霉菌对獐牙菜苦苷、当药醇苷的转化作用研究
• 概述
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 方法与结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 三、产物的制备工艺研究
• 概述
• 3.1 仪器与试剂
• 3.2 方法与结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 四、吸收机制及活性研究
• 概述
• 4.1 仪器与试剂
• 4.2 方法与结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 体外吸收模型的评述及其在中药研究中的应用
• 综述参考文献
• 致谢