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龙葵皂苷分离纯化、体外抗肿瘤活性及其分子机制研究

2020-12-11阅读(894)

龙葵皂苷分离纯化、体外抗肿瘤活性及其分子机制研究

论文摘要

本文以从龙葵中分离得到的皂苷及solamargine为材料,以人肝癌细胞株SMMC-7721、人胃癌细胞株MGC-803、人非小细胞肺腺癌细胞株NCI-H157为体外实验模型,通过MTT法进行体外抗肿瘤活性筛选,并以人胃癌细胞株MGC-803为靶细胞,对筛选出来的龙葵皂苷单体solanigroside P、β1-solasonine及solamargine进行初步抗肿瘤作用及机制的研究。全文分如下四部分。第一部分：龙葵皂苷的分离纯化研究龙葵药材采用70%乙醇回流提取,经正丁醇萃取得浸膏,甲醇溶解后,采用丙酮-乙醚（1：1）分部沉淀,不同的龙葵皂苷部位进行体外抗肿瘤活性筛选。对有活性的皂苷部位经过硅胶柱层析分离,采用甲醇-氯仿进行梯度洗脱,反复多次柱层析,得到龙葵皂苷。第二部分：龙葵皂苷体外抗肿瘤活性的筛选以人肝癌细胞株SMMC-7721、人胃癌细胞株MGC-803、人非小细胞肺腺癌NCI-H157为体外实验模型,对龙葵皂苷部位、龙葵次级皂苷及solamargine进行细胞毒性筛选。MTT结果显示30%皂苷部位、龙葵次级皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine显著抑制SMMC-7721、 MGC-803、NCI-H157的增殖,其作用呈现浓度和时间依赖性。第三部分：龙葵皂苷对人胃癌细胞MGC-803诱导凋亡作用采用不同浓度的龙葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine作用于人胃癌细胞MGC-803,苏木素、姬姆萨、伊红、Hoechst33258进行染色,并通过光学显微镜或荧光显微镜对细胞或细胞核形态变化进行观察拍照。结果显示细胞经处理后细胞形态发生明显变化,如细胞数量减少,分布稀疏；有些细胞体积变小、变圆,细胞皱缩、变形；细胞核变形,核变小,核固缩,染色质发生凝固,荧光增强,有的呈现半月形,有些细胞核裂解为碎片,产生凋亡小体,表明细胞发生凋亡。采用PI对细胞进行染色,流式细胞仪检测,实验结果显示：经过龙葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine处理后细胞均出现细胞凋亡所特有的亚二倍峰（sub-G1）,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而增大,呈现剂量依赖性。细胞周期分析结果显示：经过龙葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine处理后,Go/G1期和G2/M期比率减少,处于S期的细胞明显增多,细胞阻滞于S期。第四部分：龙葵皂苷诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡机制的研究采用免疫细胞化学检测方法检测基因表达,结果显示,细胞经过20μg/mL龙葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine处理后,p53和Bcl-2表达减弱,Bax表达增强。综上所述,龙葵皂苷及solamargine具有抑制SMMC-7721、MGC-803、NCI-H157生长的作用。对MGC-803细胞而言,药物通过诱导MGC-803细胞凋亡来抑制肿瘤细胞增殖。其诱导细胞调亡的机制与阻滞细胞于S期,上调Bax表达,下调p53和Bcl-2表达有关。本文的研究为龙葵的临床应用提供了实验依据,对龙葵皂苷的进一步研究将有可能提供一种有效的抗肿瘤新药。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略语
  • 前言
  • 第一章 文献综述
  • 1.1 皂苷抗肿瘤机制研究现状
  • 1.2 龙葵皂苷抗肿瘤作用及机制研究现状
  • 1.3 本论文研究目的意义及主要内容
  • 参考文献
  • 第二章 龙葵皂苷的提取与分离纯化
  • 2.1 材料与仪器设备
  • 2.2 试验方法
  • 2.3 结果与分析
  • 2.3.1 龙葵皂苷的提取分离与纯化
  • 2.3.2 龙葵皂苷定性分析结果
  • 2.3.3 龙葵皂苷分离纯化结果
  • 2.3.4 龙葵皂苷纯度鉴定
  • 2.3.5 龙葵皂苷结构鉴定
  • 2.4 本章小结
  • 参考文献
  • 第三章 龙葵皂苷体外抗肿瘤的活性评价和筛选
  • 3.1 材料与仪器
  • 3.2 试验方法
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 不同皂苷部位体外抗肿瘤作用研究
  • 3.3.2 龙葵次级皂苷体外抗肿瘤作用研究
  • 3.4 本章小结
  • 参考文献
  • 第四章 龙葵皂苷诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡的研究
  • 4.1 龙葵皂苷对细胞增殖的影响
  • 4.1.1 材料与仪器
  • 4.1.2 试验方法
  • 4.1.3 结果与分析
  • 4.2 龙葵皂苷对MGC-803细胞形态的影响
  • 4.2.1 材料与仪器
  • 4.2.2 试验方法
  • 4.2.3 结果与分析
  • 4.2.4 讨论
  • 4.3 龙葵皂苷对MGC-803细胞周期分布和凋亡率的影响
  • 4.3.1 材料与仪器
  • 4.3.2 试验方法
  • 4.3.3 结果与分析
  • 4.3.4 讨论
  • 4.4 本章小结
  • 参考文献
  • 第五章 龙葵皂苷诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡的机理研究
  • 5.1 材料与仪器
  • 5.2 试验方法
  • 5.3 结果与分析
  • 5.4 讨论
  • 5.5 本章小结
  • 参考文献
  • 全文总结
  • 致谢
  • 攻读硕士学位期间发表文章目录

    • 相关论文文献

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