大鼠骨髓间充质干细胞体外定向分化为心肌细胞的实验研究

论文摘要

骨髓基质细胞（BMSC）具有干细胞的特性并能分化为间充质组织。我们从大鼠骨髓单个核细胞（BMNC）中分离间充质干细胞（MSC）。体外培养的骨髓单个核细胞来源的间充质干细胞呈现纤维状,用 12μmol/L 5-氮胞苷（5-aza）处理细胞,细胞的表型随即发生变化。在相差显微镜下观察,一周后,细胞的体积增大,并朝一个方向延伸,形成杆状,两周后,这些细胞与临近的细胞融合,并在三周后,形成类心肌管状结构。通过 RT-PCR 检测后,在诱导前他们都表达 α-skeletal actin、desmin 和 MEF-2D,在诱导后 β-MHC 和 GATA4 才表达。western blot 结果表明 α-actin 在诱导前后都表达而myosin 则在诱导后才得以表达。利用免疫荧光方法标记 α-actin 和 β-MHC 两种蛋白质发现在诱导前后整个细胞都表达 α-actin,而在诱导后 myosin 才在细胞质中表达。这些结果表明分化的骨髓单个核细胞来源的间充质干细胞具有向新生心室肌分化的潜能,而且它处于心肌祖细胞和分化后的肌细胞的状态之间,并且这些细胞可为心肌梗塞移植治疗的提供一种潜在的供体细胞。

论文目录

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• 目录
• 1 引言
• 1.1 胚胎心肌细胞移植治疗心肌梗死
• 1.2 骨骼肌卫星细胞移植治疗心肌梗死
• 1.3 骨髓干细胞概述
• 1.4 骨髓干细胞分化形成心肌细胞
• 1.5 骨髓干细胞的成血管作用
• 1.6 细胞因子动员骨髓干细胞修复心肌损伤
• 1.7 心肌再生对心功能的影响
• 1.8 骨髓干细胞移行分化为心肌组织的分子机制
• 1.9 成体干细胞可塑性理论受到的冲击
• 1.10 “细胞融合”学说
• 1.11 是否高估了成体干细胞的分化潜能
• 1.12 骨髓干细胞移植函待解决的问题与临床应用前景
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 骨髓间充质细胞
• 2.1.2 肌动蛋白抗体和肌球蛋白抗体
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要仪器及设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 骨髓间充质干细胞的分离和纯化
• 2.2.2 5-aza 对骨髓间充质干细胞诱导的最适浓度筛选
• 2.2.3 RT-PCR
• 2.2.4 肌动蛋白和肌球蛋白的免疫印迹
• 2.2.5 肌动蛋白和肌球蛋白免疫荧光标记和Hoechst33342 标记细胞核DNA
• 3 结果
• 3.1 骨髓单个核细胞来源的间充质干细胞的分离和培养
• 3.2 5-aza 对间充质干细胞增殖的测定
• 3.3 5-aza 诱导后间充质干细胞的形态学变化
• 3.4 5-aza 诱导前后心肌特异基因的表达情况
• 3.5 5-aza 诱导前后心肌特异蛋白质的表达情况
• 4 讨论
• 4.1 Percoll 密度梯度离心和贴壁法分离骨髓间充质干细胞的优点
• 4.2 5-aza 对间充质干细胞增殖和分化的影响
• 4.3 间充质干细胞体外分化为心肌细胞的鉴定
• 4.4 本实验从骨髓单个核分离间充质干细胞作为移植供体细胞的优点
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢