DC致敏CIK联合新城疫病毒改善胃癌恶液质的实验研究

论文摘要

目的:基于树突状细胞（DC）致敏的细胞因子诱导杀伤细胞（CIK）联合新城疫病毒（NDV）可有效杀伤胃癌裸鼠模型体内胃癌的实验研究（本课题组已完成该部分实验,山东省自然科学基金资助课题,项目基金号:Y2006C22）,本实验探讨该方法在改善胃癌恶液质方面的作用。方法:取健康成人外周血分离单个核细胞,用于诱导培养DC及CIK。体外培养人胃癌细胞SGC-7901,冻融法制备胃癌SGC-7901抗原悬液,用于胃癌抗原冲击致敏DC;注射5×107个胃癌细胞到裸鼠右侧腹股沟皮下建立胃癌裸鼠模型。25只裸鼠称重后随机分为五组:A组:裸鼠未经处理,正常饲养;B组:瘤内注射PBS;C组:瘤内注射负载胃癌抗原的DC致敏的CIK;D组:瘤内先注射NDV,后注射CIK;E组:瘤内先注射NDV,后注射负载胃癌抗原的DC致敏的CIK。治疗第7天:（1）测量肿瘤体积;计算抑瘤率;处死裸鼠收集肿瘤标本,制备病理切片,HE染色,显微镜下观察记录肿瘤坏死面积评分。（2）称重裸鼠,计算体重增长百分比。（3）记录裸鼠疲劳程度评分。（4）处死裸鼠收集腹直肌标本,荧光定量PCR测定蛋白酶体C2亚基的相对含量。（5）使用SPSS统计软件对比分析实验组与对照组数据的统计学差异。结果:治疗第7天时,（1）E组裸鼠肿瘤体积（0.78±0.19cm3）最小（P<0.05）,肿瘤坏死面积评分（2.40±0.55）和抑瘤率（70.57%）最大（P<0.05）;（2）裸鼠平均体重增长百分比:E组（26.77%）和A组（28.53%）大于其余组（P<0.05）,B组（5.21%）最小（P<0.05）;（3）裸鼠疲劳程度评分:E组（1.60±0.55）和A组（1.00±0.00）小于其余组（P<0.05）,B组（3.80±0.45）最大（P<0.05）;（4）裸鼠腹直肌中蛋白酶体C2亚基的相对含量:E组（1.0723±0.4309）和A组（1.0138±0.1832）小于其余组（P<0.05）,B组（3.4256±0.8899）最大（P<0.05）。结论:（1）生物治疗有效杀伤胃癌的同时使荷瘤小鼠体重明显增加。（2）生物治疗有效杀伤胃癌的同时使荷瘤小鼠疲劳程度明显减轻。（3）生物治疗有效杀伤胃癌的同时明显减少荷瘤小鼠肌肉的分解。（4）治疗效果越好的生物治疗方法改善肿瘤恶液质的作用越明显。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药物及试剂
• 1.1.2 主要仪器
• 1.1.3 实验细胞
• 1.1.4 新城疫病毒
• 1.1.5 实验动物
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 动物模型建立与不同生物治疗方法实施
• 1.2.1.1 肿瘤细胞培养和胃癌裸鼠模型建立
• 1.2.1.2 效应细胞制备
• 1.2.1.3 生物治疗
• 1.2.2 生物治疗效果观察
• 1.2.2.1 肿瘤生长和坏死情况
• 1.2.2.2 体重变化
• 1.2.2.3 疲劳程度评分
• 1.2.2.4 腹直肌C2 subunit相对含量比较
• 1.2.2.4.1 肌肉组织总RNA的提取
• 1.2.2.4.2 RNA逆转录为cDNA
• 1.2.2.4.3 荧光定量PCR反应
• 1.2.2.4.4 琼脂糖凝胶电泳反应
• 1.3 统计学处理
• 第二章 结果
• 2.1 DC及CIK的形态学观察及表型鉴定
• 2.1.1 DC的形态学观察及细胞表型分析
• 2.1.2 CIK的形态学观察及细胞表型分析
• 2.1.3 DC与CIK共同培养形态学观察
• 2.2 不同生物治疗方法杀瘤效果
• 2.3 不同生物治疗方法对荷瘤裸鼠的影响
• 2.3.1 各组小鼠体重增长情况
• 2.3.2 各组小鼠疲劳程度评分
• 2.3.3 各组小鼠腹直肌中蛋白酶体C2亚基的表达情况
• 第三章 讨论
• 3.1 本课题的意义
• 3.2 NDV联合DC-CIK可有效治疗胃癌和改善胃癌恶液质
• 3.3 小结
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 综述参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 附录
• 致谢