本文主要研究内容
作者饶继红（2019）在《CA16 VP1单克隆抗体的制备及其抗原表位分析》一文中研究指出：柯萨奇病毒A组16型（CA16）可引起全球范围内的婴儿和学龄前儿童手足口病的暴发流行,至今还没有十分有效的疫苗或抗病毒药物用于防治CA16相关疾病,同时其基因型多且复杂也给CA16临床诊断和检测带来了挑战。本论文致力于制备抗CA16 VP1单克隆抗体,不仅为研发预防性或治疗性抗CA16病毒药物奠定基础,而且为建立CA16特异性检测方法提供重要依据。本文通过优化ELISA实验中每个步骤的反应条件,包括CA16病毒抗原和待测血清稀释浓度、ELISA封闭液的种类及浓度、封闭温度和时间、HRP酶标二抗的反应时间、H2O2底物溶液的反应时间,为CA16 VP1特异性单抗制备建立了有效的ELISA抗体检测方法。利用pGEX-CA16-VP1重组蛋白抗原免疫小鼠及杂交瘤技术制备CA16 VP1单克隆抗体,最终获得3株理想的单克隆细胞株:CA16 VP1-1A4、CA16 VP1-1C8、CA16 VP1-4E3。通过RT-nPCR获得891bp CA16 VP1基因全长并测序成功,同时利用生物信息学软件对其抗原表位及其他生物学特性进行分析,EMBOSS结合Protean预测CA16 VP1 B细胞抗原表位共有11个,SYFPEITHI预测KMTDPPAQV,RVYMRIKHV,NLIETRCVL,MMGTFSIRT,WQTATNPSV,FDAEFTFVV这六条多肽为CA16 VP1 MHC的优选抗原表位。本试验利用凝胶层析法纯化自制的CA16 VP1单克隆抗体并标记荧光素,经ELISA方法测定效价达到1.28×104,荧光单抗纯化状态较好。同时按照梯度稀释的方法,确定1:32作为荧光抗体最佳稀释比。通过直接免疫荧光法,验证荧光单克隆抗体不与EV71和CB3发生交叉反应,说明其具有很好的特异性。试验结果显示,本研究建立的间接ELISA方法能够有效地检测CA16 VP1抗体,制备的CA16 VP1单克隆抗体质量良好,效价较高而且具有明显的特异性,可以应用于病毒的快速检测及分离鉴定。
Abstract
ke sa ji bing du Azu 16xing （CA16）ke yin qi quan qiu fan wei nei de ying er he xue ling qian er tong shou zu kou bing de bao fa liu hang ,zhi jin hai mei you shi fen you xiao de yi miao huo kang bing du yao wu yong yu fang zhi CA16xiang guan ji bing ,tong shi ji ji yin xing duo ju fu za ye gei CA16lin chuang zhen duan he jian ce dai lai le tiao zhan 。ben lun wen zhi li yu zhi bei kang CA16 VP1chan ke long kang ti ,bu jin wei yan fa yu fang xing huo zhi liao xing kang CA16bing du yao wu dian ding ji chu ,er ju wei jian li CA16te yi xing jian ce fang fa di gong chong yao yi ju 。ben wen tong guo you hua ELISAshi yan zhong mei ge bu zhou de fan ying tiao jian ,bao gua CA16bing du kang yuan he dai ce xie qing xi shi nong du 、ELISAfeng bi ye de chong lei ji nong du 、feng bi wen du he shi jian 、HRPmei biao er kang de fan ying shi jian 、H2O2de wu rong ye de fan ying shi jian ,wei CA16 VP1te yi xing chan kang zhi bei jian li le you xiao de ELISAkang ti jian ce fang fa 。li yong pGEX-CA16-VP1chong zu dan bai kang yuan mian yi xiao shu ji za jiao liu ji shu zhi bei CA16 VP1chan ke long kang ti ,zui zhong huo de 3zhu li xiang de chan ke long xi bao zhu :CA16 VP1-1A4、CA16 VP1-1C8、CA16 VP1-4E3。tong guo RT-nPCRhuo de 891bp CA16 VP1ji yin quan chang bing ce xu cheng gong ,tong shi li yong sheng wu xin xi xue ruan jian dui ji kang yuan biao wei ji ji ta sheng wu xue te xing jin hang fen xi ,EMBOSSjie ge Proteanyu ce CA16 VP1 Bxi bao kang yuan biao wei gong you 11ge ,SYFPEITHIyu ce KMTDPPAQV,RVYMRIKHV,NLIETRCVL,MMGTFSIRT,WQTATNPSV,FDAEFTFVVzhe liu tiao duo tai wei CA16 VP1 MHCde you shua kang yuan biao wei 。ben shi yan li yong ning jiao ceng xi fa chun hua zi zhi de CA16 VP1chan ke long kang ti bing biao ji ying guang su ,jing ELISAfang fa ce ding xiao jia da dao 1.28×104,ying guang chan kang chun hua zhuang tai jiao hao 。tong shi an zhao ti du xi shi de fang fa ,que ding 1:32zuo wei ying guang kang ti zui jia xi shi bi 。tong guo zhi jie mian yi ying guang fa ,yan zheng ying guang chan ke long kang ti bu yu EV71he CB3fa sheng jiao cha fan ying ,shui ming ji ju you hen hao de te yi xing 。shi yan jie guo xian shi ,ben yan jiu jian li de jian jie ELISAfang fa neng gou you xiao de jian ce CA16 VP1kang ti ,zhi bei de CA16 VP1chan ke long kang ti zhi liang liang hao ,xiao jia jiao gao er ju ju you ming xian de te yi xing ,ke yi ying yong yu bing du de kuai su jian ce ji fen li jian ding 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自长春理工大学的饶继红，发表于刊物长春理工大学2019-10-23论文，是一篇关于柯萨奇病毒组型论文,单克隆抗体论文,抗原表位分析论文,直接免疫荧光抗体论文,长春理工大学2019-10-23论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自长春理工大学2019-10-23论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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