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姜黄素对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及HSP70表达影响研究

2020-12-11阅读(764)

姜黄素对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及HSP70表达影响研究

论文摘要

目的：探讨姜黄素对体外培养的缺氧/复氧心肌细胞的保护和抗凋亡作用，明确其保护与浓度关系，以及姜黄素抗凋亡的机制与热休克蛋白（HSP70）表达的关系，探讨药物诱导后HSP70表达的量效与时相的变化，明确药物诱导后保护的时相及效果。方法：取出生1～3d的SD大鼠乳鼠的心肌细胞原代培养，至同步搏动良好的原代培养细胞用于实验；用MTT法检测姜黄素对心肌细胞的毒副作用，计算IC50，寻找对心肌细胞无明显毒副作用的最佳干预浓度，并取高、中、低浓度用于实验；细胞计数种板、实验分组和姜黄素干预后，应用连续光谱多功能酶标仪检测各组、各时间点细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量；使用Hoechst33342和碘化丙啶（PI）双染后荧光显微镜照相的方法观测细胞凋亡与坏死；免疫组织化学方法观察各组心肌细胞中HSP70表达情况。结果：1.姜黄素作用于正常心肌细胞时IC50为77.57μmol/L，本实验分组中选取的姜黄素高、中、低浓度组分别为50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L。2.各组细胞培养液中的LDH活性的比较对相同时间点各组细胞比较，发现正常对照组LDH活性最低； LDH活性随姜黄素浓度降低而活性升高；各组细胞不同时间点比较，发现正常对照组细胞随时间改变，LDH活性改变无统计学意义（p=0.292），经过缺氧/复氧损伤的心肌细胞随时间延长，LDH活性增加，并且各组细胞LDH活性随时间延长呈先递增后递减趋势，于12h达高峰，24h时有所降低。3.各组细胞培养液中的MDA含量的比较对相同时间点各组细胞比较，发现正常对照组MDA含量最低；MDA含量随姜黄素浓度降低而活性升高；各组细胞不同时间点比较，发现正常对照组细胞随时间改变，MDA含量改变无统计学意义（p=0.122），经过缺氧/复氧损伤的心肌细胞随时间延长，MDA含量有增加不同，并且各组MDA含量随时间延长呈递增趋势，于24h最高。4.各组细胞的凋亡与坏死比较相同时间点各组细胞比较：缺氧/复氧0h，细胞凋亡不多，各组中未见明显的凋亡细胞。缺氧/复氧2h、4h、12h、24h各处理组细胞，与正常对照组相比，可见细胞凋亡增多，但给予姜黄素干预组细胞较I/R组细胞凋亡少，并且细胞凋亡与姜黄素浓度成反比。不同时间点比较：正常对照组细胞随时间改变，细胞凋亡不明显；而经过缺氧/复氧损伤的心肌细胞随时间延长，凋亡呈递增趋势；给予姜黄素干预组细胞较I/R组细胞凋亡少，并且细胞凋亡与姜黄素浓度成反比。5.免疫组织化学检测各组细胞中HSP70变化相同时间点各组细胞比较：缺氧/复氧0h，细胞中HSP70表达较少，几乎不表达。缺氧/复氧2h、4h、12h、24h各处理组细胞，与正常对照组相比，可见细胞中HSP70增多，但给予姜黄素干预组细胞较I/R组细胞表达增多，并且细胞中HSP70表达量与姜黄素浓度成正比。不同时间点比较：正常对照组细胞中HSP70几乎不表达，随时间改变，无明显变化；而经过缺氧/复氧损伤的心肌细胞随时间延长，细胞中HSP70表达增加。给予姜黄素干预组细胞较I/R组细胞HSP70表达量增多，并且细胞中HSP70表达量与姜黄素浓度成正比。结论：1.姜黄素对体外培养的缺氧/复氧心肌细胞具有保护和抗凋亡作用，其保护作用与姜黄素浓度呈现一定的剂量依赖关系。2.随姜黄素浓度增加，缺氧/复氧心肌细胞HSP70表达增加，并且缺氧/复氧损伤心肌细胞随时间延长，细胞内HSP70表达增加。姜黄素对缺氧/复氧心肌细胞保护作用可能与HSP70表达增加有关。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第1章 引言
  • 第2章 材料与方法
  • 2.1 实验材料
  • 2.1.1 动物及实验室
  • 2.1.2 主要试剂
  • 2.1.3 主要仪器
  • 2.1.4 主要溶液的配制
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 原代心肌细胞培养
  • 2.2.2 MTT 法选择姜黄素干预浓度
  • 2.2.3 心肌细胞缺氧/复氧模型建立
  • 2.2.4 实验分组
  • 2.2.5 各组细胞培养液中的 LDH 活性的测定
  • 2.2.6 各组细胞培养液中的 MDA 含量的测定
  • 2.2.7 细胞凋亡与坏死检测
  • 2.2.8 免疫组织化学检测 HSP70 表达
  • 2.3 统计学分析
  • 第3章 实验结果
  • 3.1 原代心肌细胞培养观察
  • 3.1.1 细胞存活率测定
  • 3.1.2 细胞形态学观察
  • 3.2 姜黄素干预浓度选择
  • 3.3 各组细胞培养液中的 LDH 活性的比较
  • 3.4 各组细胞培养液中的 MDA 含量的比较
  • 3.5 各组细胞的凋亡与坏死比较
  • 3.6 免疫组织化学检测各组细胞中 HSP70 变化
  • 第4章 讨论
  • 4.1 原代心肌细胞培养
  • 4.2 姜黄素干预浓度的选择
  • 4.3 姜黄素对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用
  • 4.4 姜黄素对缺氧/复氧心肌细胞的 HSP70 表达的影响
  • 第5章 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 攻读学位期间的研究成果
  • 综述
  • 参考文献

    • 相关论文文献

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