显微镜下型多血管炎患者血浆抗MPO抗体、铜蓝蛋白和MPO之间相互作用的研究

论文摘要

[背景与目的]抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA）相关小血管炎是一组自身免疫性疾病。ANCA是其血清学诊断工具，以酒精固定的中性粒细胞为底物，应用间接免疫荧光法可分为胞浆型（cytoplasmic,c-ANCA）和环核型（perinuclear,p-ANCA），其主要靶抗原分别为蛋白酶3（proteinase 3，PR3）和髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）。其中c-ANCA/PR3-ANCA主要见于韦格纳肉芽肿病（Wegener’s granulomatosis，WG）患者，而p-ANCA/MPO-ANCA则主要见于显微镜下型多血管炎（microscopic polyangiitis，MPA）患者。MPA是中国最常见的ANCA相关系统性血管炎（ANCA associated systemic vasculitis，AASV）。抗MPO抗体被认为是MPA诊断的重要血清学标记物，但是其发病机制并未完全清楚。MPO是中性粒细胞胞浆中的主要氧化酶之一，血浆铜蓝蛋白是MPO的生理抑制剂。抗MPO抗体、血浆铜蓝蛋白和MPO之间的相互作用可能在MPA的发病机制中起到重要的作用，但国内尚未见相关报道。本实验旨在研究用亲和层析提取的原发MPA患者抗MPO抗体对MPO氧化活性的抑制作用，并进一步研究MPO、铜蓝蛋白和抗MPO抗体之间的关系，以期对MPA的发病机制提供理论基础。[实验方法]11例患者血浆均来自北京大学第一医院肾内科1998年10月—2006年4月收治的抗MPO抗体阳性的原发性MPA患者，12例健康献血员的血清作为正常对照。应用蛋白G亲合层析的方法纯化血清中的免疫球蛋白G（IgG），应用MPO亲和层析柱纯化IgG中的抗MPO抗体，应用高度纯化的人中性粒细胞MPO在0.127mg/ml联大茴香胺，0.001％过氧化氢条件下建立稳定的酶反应体系。分别测定在不同浓度的患者抗MPO抗体、铜蓝蛋白和正常人IgG存在条件下MPO的酶氧化活性，并比较MPA患者的抗MPO抗体和铜蓝蛋白抑制MPO的酶氧化活性的差异。应用竞争性酶联免疫吸附试验（ELISA）进一步测定抗MPO抗体、铜蓝蛋白和MPO之间的相互作用。在同等条件下，MPO的酶氧化活性的下降=30％视为有抑制作用。[实验结果]1．应用终浓度为40ng/ml的MPO建立稳定的210μl容积的酶反应体系，米氏常数（Km）为0.705mM。2．11名MPA患者中有7名患者的抗MPO抗体能够以非竞争性抑制的方式剂量依赖性的抑制MPO的活性。平均抑制率为32％，平均抑制常数（Ki）为0.124mg/ml（Dixon plot作图法）。3．铜蓝蛋白能够以竞争性抑制的方式剂量依赖和时间依赖性的抑制MPO的活性。平均抑制率为75％，平均抑制常数（Ki）为0.547 mg/ml（Dixon plot作图法）。4．抗MPO抗体能够抑制MPO和铜蓝蛋白之间的结合，最大抑制率可达到75.4±11.6％。[结论]1．大多数MPA患者的抗MPO抗体能够以剂量依赖性的方式非竞争性的抑制MPO的氧化活性，与MPO的生理抑制剂铜蓝蛋白抑制方式不同。2．抗MPO抗体可以抑制MPO和铜蓝蛋白的结合。3．抗MPO抗体的上述作用可能与原发性MPA的发病机制有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 正文
• 参考文献
• 英文缩略语表
• 致谢