桑黄菌发酵菌粉及其组分抗小鼠移植性肝癌H22作用的研究

论文摘要

桑黄（Phellinus igniarius（L.ex.Fr）Quel）,是一类具有重要药用价值的大型真菌,最早收载于李时珍《本草纲目》中。由于桑黄天然子实体稀少,人工栽培困难,目前采用液体发酵生产。本论文对液体发酵所得桑黄菌发酵菌粉（DMCB）行了成分分析并与子实体进行了分析对比,并采用荷瘤小鼠肝癌H22模型,研究了发酵菌粉及其各提取物组分的抗肝癌作用,并对其可能的机制进行了初步探讨。结果表明桑黄菌发酵菌粉营养丰富,含有蛋白25.73%,氨基酸14.50%,粗多糖28.55%。不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,以亚油酸,油酸为主。还含有丰富的多糖、三萜类化合物、酚类物质等。桑黄菌发酵菌粉在很多方面已经达到或超过了桑黄子实体,与子实体相比,同样具有较高营养价值和开发价值。研究表明桑黄菌发酵菌粉及其各提取物组分对荷瘤小鼠肝癌H22都具有一定的抗肿瘤作用,其中,桑黄菌发酵菌粉及其组分II（桑黄多糖组分）具有显著的抗肿瘤作用,高剂量抑瘤率分别为33.5%和40.3%。桑黄菌发酵菌粉及其各提取物组分组与模型组相比对胸腺指数有显著影响,而对的脾脏指数影响却并不明显,但数值上都低于正常组水平。病理切片可以看出,在高剂量的菌粉、多糖作用后,肿瘤细胞呈团弥漫性分布,与模型组相比坏死细胞明显增多。同时,免疫组化检测也表明桑黄菌发酵菌粉及其多糖组分能明显的降低瘤组织中bcl-2基因蛋白的表达,提高小鼠瘤组织中的bax基因蛋白的表达。与模型组相比,桑黄菌发酵菌粉及其多糖组分能明显的提高小鼠肝脏中的SOD、CAT、GSH-Px酶的活性。气相色谱分析各主要单糖组成及质量分数分别为:红外光谱分析结果显示,该工艺条件下提取的桑黄菌菌粉多糖产品中富含葡萄糖,且糖苷键主要是α-型。药效研究表明桑黄菌发酵菌粉三个组分中,多糖组分具有最显著的抗肿瘤活性。试验采用响应面法对其提取工艺进行了优化,得到桑黄菌发酵菌粉多糖提取的理想工艺条件为:温度为84℃,提取时间为2.7 h,液料比为33.5∶1。桑黄菌发酵菌粉多糖的预测提取率达到24.90%。桑黄菌发酵菌粉多糖的主要单糖组成及质量分数分别为:甘露糖3.65%,葡萄糖12.00%,半乳糖0.24%。多糖产品中含有酸性多糖,糖苷键主要是α-型。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 肝细胞癌及其治疗现状
• 1.1.1 肝细胞癌的现状
• 1.1.2 肝细胞癌治疗现状
• 1.1.3 中药在肝细胞癌治疗中的应用
• 1.1.3.1 健脾理气法
• 1.1.3.2 清热解毒法
• 1.1.3.3 介入治疗
• 1.1.3.4 中西医结合治疗
• 1.2 桑黄菌简介
• 1.2.1 桑黄菌生物学特性
• 1.2.2 桑黄菌人工培养
• 1.2.2.1 固体培养
• 1.2.2.2 发酵培养
• 1.2.3 桑黄菌的化学成分研究
• 1.2.3.1 多糖类物质
• 1.2.3.2 吡喃酮及苯并吡喃酮类成分
• 1.2.3.3 黄酮类成分
• 1.2.3.4 酚及有机酸类化合物
• 1.2.3.5 甾体类成分
• 1.2.3.6 香豆素类成分
• 1.2.3.7 色素类成分
• 1.2.3.8 其他成分
• 1.2.4 桑黄菌的主要药理作用
• 1.2.4.1 抗肿瘤作用
• 1.2.4.2 保护肝脏作用
• 1.2.4.3 抗炎作用
• 1.2.4.4 降血糖作用
• 1.3 本课题研究的主要内容
• 第二章 桑黄菌菌粉与子实体成分分析对比
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料与仪器
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 常规成分分析
• 2.3.2 脂肪酸成分分析
• 2.3.3 氨基酸成分分析
• 2.3.4 粗三萜含量测定
• 2.3.5 多酚含量测定
• 2.3.6 黄酮含量测定
• 2.3.7 粗多糖含量的测定
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 桑黄菌发酵菌粉和桑黄子实体常规成分分析对比
• 2.4.2 桑黄菌发酵菌粉和桑黄子实体脂肪酸成分分析对比
• 2.4.3 桑黄菌发酵菌粉和子实体中氨基酸对比分析结果
• 2.4.4 桑黄菌发酵菌粉和子实体中主要活性成分的对比分析结果
• 2.5 本章小结
• 第三章 桑黄菌菌粉及其提取物组分抗肝癌初步药效学研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料与仪器
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 主要仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 桑黄菌发酵菌粉不同组分的制备
• 3.3.2 动物模型的建立
• 3.3.3 剂量选取
• 3.3.4 实验设计
• 3.4 疗效评价
• 3.4.1 抑瘤率测定
• 3.4.2 肿瘤体积生长曲线
• 3.4.3 对荷瘤小鼠免疫器官的影响
• 3.4.4 荷瘤小鼠的生存期作用
• 22 组织病理学的影响'>3.4.5 对小鼠肿瘤H₂₂组织病理学的影响
• 22 肿瘤组织中bcl -2 和bax 蛋白表达'>3.4.6 免疫组化法检测H₂₂ 肿瘤组织中bcl -2 和bax 蛋白表达
• 3.4.7 荷瘤小鼠肝脏中的SOD、MDA、GSH-Px、 CAT 含量的测定
• 3.4.8 统计分析
• 3.5 结果与讨论
• 3.5.1 对肿瘤和体重的影响
• 3.5.2 对肿瘤体积生长曲线的影响
• 3.5.3 对免疫器官的影响
• 3.5.4 对肝癌小鼠存活时间的影响
• 3.5.5 对肿瘤组织病理形态学的影响
• 3.5.6 对小鼠瘤组织中的中bcl-2 和bax 蛋白表达的影响
• 3.5.7 对荷瘤小鼠肝脏抗氧化功能的影响
• 3.6 本章小结
• 第四章 桑黄菌发酵菌粉多糖提取工艺的优化
• 4.1 引言
• 4.2 材料与仪器
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 实验仪器
• 4.3 方法
• 4.3.1 桑黄菌发酵菌粉多糖提取的工艺流程
• 4.3.2 桑黄菌发酵菌粉多糖提取率的测定
• 4.3.3 桑黄菌发酵菌粉多糖提取过程中的单因素影响
• 4.3.4 采用响应面分析法优化桑黄菌发酵菌粉多糖的提取工艺
• 4.4 桑黄菌发酵菌粉多糖的基本特征分析
• 4.4.1 多糖中肽和糖含量的测定
• 4.4.2 多糖分子量分布
• 4.4.3 多糖单糖组成分析
• 4.4.4 多糖红外光谱检测
• 4.5 结果与讨论
• 4.5.1 桑黄菌发酵菌粉多糖提取过程中的单因素影响
• 4.5.1.1 液料比对桑黄菌发酵菌粉多糖提取率的影响
• 4.5.1.2 提取温度对桑黄菌发酵菌粉多糖提取率的影响
• 4.5.1.3 提取时间对桑黄菌发酵菌粉多糖提取率的影响
• 4.5.2 采用响应面分析法优化桑黄菌发酵菌粉多糖的提取工艺
• 4.5.2.1 响应面分析因素水平的选取
• 4.5.2.2 响应面分析方案及结果
• 4.5.2.3 因素间的交互作用
• 4.6 桑黄菌发酵菌粉多糖的基本特征分析结果
• 4.6.1 多糖中肽和糖含量
• 4.6.2 桑黄菌发酵菌粉多糖分子量分布
• 4.6.3 桑黄菌发酵菌粉多糖单糖组成分析
• 4.6.4 桑黄菌发酵菌粉多糖红外光谱检测
• 4.7 本章小结
• 论文总结及展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文