丙戊酸钠、卡马西平和托吡酯对戊四氮点燃大鼠模型肝脏和肾脏影响的研究

论文摘要

目的:癫痫（epilepsy, EP）是神经系统最常见的慢性反复发作性疾病之一,是由各种原因引起的脑功能障碍综合征,是脑细胞群异常超同步化放电而引起的发作性的、突然的、暂时的脑功能紊乱症。迄今为止,在临床中,抗癫痫药物（antiepileptic drugs,AEDs）仍然是癫痫治疗的主要手段,甚至有一部分癫痫患者需要终生服用AEDs,因此癫痫患者的生活质量的保证备受关注。影响癫痫患者生活质量的因素有很多,如发作类型及严重程度、发作频率、药物的不良反应、病程等,其中发作频率和药物的不良反应是影响癫痫患者生活质量的主要因素。减少不良反应的发生成为癫痫患者最关心的问题之一。本试验主要是研究在服用抗癫痫药物过程中出现肝脏、肾脏异常与细胞凋亡的相关性。细胞凋亡是一种细胞死亡方式,其研究主要集中在Fas/FasL的表达。Fas配体（FasL）与Fas受体（FasR）分别属肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）及TNF受体（tumor necrosis factor receptor, TNFR）家族,是以膜分子或可溶性分子形式存在于细胞表面介导凋亡的蛋白质分子。本试验利用戊四氮（Pentylenetetrazole,PTZ）成功点燃动物模型共30只,将动物分成五组,即实验组分为丙戊酸钠（Valproic acid,VPA）组、卡马西平（Carbamazepine,CBZ）组、托吡酯（Topiramate,TPM）组;对照组分为戊四氮（PTZ）组、生理盐水（NS）组。实验组分别给予成人体重平均剂量的25倍药物进行干预,对照组分别给予同剂量的PTZ和NS。通过苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏、肾脏细胞的形态;免疫组化观察肝脏和肾脏的凋亡蛋白Fas和FasL表达情况,从而得到抗癫痫药物在癫痫患者的治疗过程中肝脏、肾脏异常与细胞凋亡的相关性。方法:1癫痫动物模型的建立:健康10周龄雄性Sprague- Dawley（SD）大鼠35只（体重200±20g）。给予大鼠每日按体重35mg/kg腹腔注射1%戊四氮（PTZ）一次,对照组每日腹腔注射等量的生理盐水,20天后观察大鼠行为学的变化。依据Racine分级标准:0级:无任何反应;1级:面部阵挛,包括眨眼、动须、节律性咀嚼;2级:1级基础加节律性点头;3级:2级加前肢阵挛;4级:3级加后肢站立;5级:4级加摔倒。对动物逐个进行观察记录,凡已获得连续3次Ⅱ级或Ⅲ级以上发作者,被认为完全点燃。共造模成功30只,按随机分组的方法将大鼠分为VPA组（n=6）,CBZ组（n=6）,TPM组（n=6）,PTZ组（n=6）和NS组（n=6）。造模过程中大鼠死亡2只（致癫过程中动物出现癫痫持续状态,导致呼吸衰竭而死亡）,不合格模型3只（痫性发作未达到Ⅲ级以上）均予以剔除,保证每组动物6只。2癫痫模型的药物干预:癫痫模型完全点燃后,VPA组,CBZ组和TPM组按成人体重平均剂量的25倍用自制的灌胃器进行药物干预,对照组PTZ组及NS组给予等量生理盐水,时间共20天,并观察癫痫大鼠的行为学变化。3动物取材:用4%的戊二醛从左心室进行灌注1.5小时后,将SD大鼠的腹腔剖开,取肝脏左叶和左肾组织,体积块1cm3,迅速放入4%的多聚甲醛固定液中,24小时后进行石蜡包埋,常规切片做HE染色和免疫组化。4 HE染色:标本做成石蜡切片后,经HE染色后在光镜观察细胞形态。5免疫组化:标本做成石蜡切片后,经抗原修复、山羊血清封闭后,加Fas和FasL多克隆抗体,在经二抗、三抗孵育,DAB显色后置显微镜下观察记录。结果:1各种抗癫痫药物对癫痫大鼠的控制情况:各组大鼠均出现了不同程度的痫性发作,生理盐水组无痫性发作,在进行灌胃处理后,实验组大鼠的痫性发作明显减少,而PTZ组大鼠痫性发作未见减少,NS组未见痫性发作。2 HE染色:光镜下肝脏、肾脏细胞的形态学改变:PTZ组、CBZ组和NS组可以见到肝细胞排列整齐,肝细胞核呈圆形或类圆形,可见较大核仁,肝窦、肝索结构正常;肾脏的肾小球及肾小管上皮细胞结构正常;而VPA组、TPM组的肝脏中央静脉周围肝细胞及肾脏肾小管上皮细胞可见空泡样变,肾小管轻度萎缩或管腔扩张,上皮细胞肿胀,胞浆内可见小脂肪空泡。3免疫组化3.1药物干预后各组肝脏细胞Fas、FasL蛋白表达阳性细胞率比较:VPA组与TPM组比较差异没有显著性（P>0.05）VPA组与CBZ组、PTZ组、NS组比较差异有显著性（P<0.05）TPM组与CBZ组、PTZ组、NS组的比较差异有显著性（P<0.05）。CBZ组、PTZ组及NS组组间比较没有显著性差异（P>0.05）。3.2药物干预后各组肾脏细胞Fas、FasL蛋白表达阳性细胞率比较:VPA组与TPM组比较差异没有显著性（P>0.05）VPA组与CBZ组、PTZ组、NS组比较差异有显著性（P<0.05）TPM组与CBZ组、PTZ组、NS组的比较差异有显著性（P<0.05） CBZ组、PTZ组及NS组组间比较没有显著性差异（P>0.05）。结论:1 HE染色观察癫痫大鼠的肝脏、肾脏细胞光镜下的形态,丙戊酸钠、托吡酯组大鼠肝脏中央静脉周围区的肝细胞及肾脏肾小管上皮细胞的空泡样变。2免疫组化观察Fas、FasL蛋白在肝脏、肾脏细胞的表达,丙戊酸钠、托吡酯引起肝脏中央静脉周围的肝脏细胞及肾脏上皮细胞凋亡蛋白表达较卡马西平及对照组引起肝脏、肾脏细胞增高。3服用AEDs过程中出现的肝脏、肾脏异常可能与细胞凋亡有关。4 Fas/FasL系统在肝脏、肾脏的细胞凋亡中起了一定作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 丙戊酸钠、卡马西平和托吡酯对戊四氮点燃大鼠模型肝脏和肾脏影响的研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 抗癫痫药物对肝脏损伤研究的新进展
• 致谢
• 个人简历