a-latrotoxin对细胞分泌的调节作用

论文题目: a-latrotoxin对细胞分泌的调节作用

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物物理

作者: 刘杰

导师: 徐涛

关键词: 分泌,膜电容,钙离子,细胞

文献来源: 华中科技大学

发表年度: 2005

论文摘要: α-latrotoxin是由黑寡妇蜘蛛分泌的仅作用于哺乳动物的毒素,在二价阳离子的作用下可以形成四聚体。其在细胞膜上存在有三种受体Neurexin,latrophilin和PTPδ。通过和受体的结合,α-latrotoxin可以通过在细胞膜上形成的穿孔以及受体介导的信号通路而引起突触前神经递质的释放以及细胞的分泌。其中在受体介导的信号通路中,α-latrotoxin除了动员细胞内钙库参与作用以外,还可以通过其它特殊途径直接作用于细胞的分泌机制。对于α-latrotoxin以及其作用方式的研究必将有助于我们对细胞囊泡分泌机制以及神经递质的释放机制的认识。本论文中通过细胞膜电容检测、细胞内Ca2+荧光测量、Ca2+光解释放以及碳纤维电极等技术手段对α-latrotoxin在大鼠胰腺β细胞的[Ca2+]i以及β细胞分泌的动力学影响进行了详细研究。研究的主要结果如下: α-latrotoxin可以在β细胞膜上形成具有大电导的通道并导致细胞外液中的Ca2+内流,但是α-latrotoxin不会引起细胞内的钙库释放。α-latrotoxin在β细胞的穿孔可被三价阳离子La3+阻断。通过使用荧光持续照射使[Ca2+]i缓慢升高来刺激分泌,我们发现α-latrotoxin降低了β细胞分泌时的钙阈值,但是不会对立即可释放囊泡库（RRP）的大小产生影响。通过Ca2+光解释放技术,我们也发现分泌的立即可释放囊泡库的分泌动力学明显加快,在同样的[Ca2+]i下,α-latrotoxin使β细胞分泌的最大速度加大并且使β细胞的分泌与Ca2+依赖关系向低钙方向移动。与之相对应的是,在无Ca2+条件下,通过碳纤维电极的检测发现α-latrotoxin可以在β细胞上引发一定的量子释放。在α-latrotoxin作用方式的研究中,α-LTXN4C是一种有效的研究工具。它是一种α-latrotoxin突变体,与受体的亲合力与野生型相同,但是其不能在细胞膜上形成穿孔,在存在二价阳离子(Ca2+或Mg2+)的情况下,α-LTXN4C会引起β细胞内的钙库释放,从而导致[Ca2+]i升高。使用α-LTXN4C处理β细胞以后,可以在分泌的钙阈值以及RRP动力学上得到与α-latrotoxin一致的结果。不仅如此,α-latrotoxin和α-LTXN4C的作用依赖于细胞外液中二价阳离子(Ca2+或Mg2+)的存在。使用不同的PKC阻断剂都可以使

论文目录:

摘要

Abstract

1 α-LTX 及其在分泌研究中的应用

1.1 黑寡妇蜘蛛毒素的种类及其作用对象

1.2 α-LTX 的结构

1.3 α-LTX 的受体

1.4 α-LTX 的作用方式

1.5 α-LTX 在分泌研究中的应用

1.6 本研究的主要内容

2 本研究应用到的主要技术和方法

2.1 膜电容检测技术

2.2 钙离子光解释放技术

2.3 钙离子的荧光检测

2.4 碳纤维电极检测

3 α-LTX 对大鼠胰腺β细胞分泌调控的研究

3.1 绪言

3.2 实验材料与方法

3.3 实验结果

3.4 讨论

4 全文总结与展望

致谢

参考文献

附录1 攻读博士学位期间发表的学术论文

附录2 主要符号和缩略词表

发布时间: 2006-04-05

参考文献

[1].AMPK超家族成员：SAD-A蛋白激酶调控胰岛β细胞功能机制的研究[D]. 聂佳.南京医科大学2012

a-latrotoxin对细胞分泌的调节作用

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