论文摘要
目的了解乙型肝炎病毒（HBV）感染与肝细胞癌（HCC）的关系,探讨乙型肝炎病毒（HBV）在肝细胞染色体上的整合规律及其在肝癌形成中的作用,了解肝细胞癌的发生机制。应用HBV-Alu-PCR方法检测肝细胞癌（HCC）中HBVDNA整合。方法提取乙肝相关性肝癌组织标本中的DNA为模板,设计HBV的亚基因片段X、C、S的引物以检测其中的HBVDNA,这个产物包括游离形式的和整合形式的HBVDNA;然后再设计HBV的上游序列和人类基因组Alu重复序列为引物,设计的引物中引入U碱基,应用巢式PCR的原理,利用降落PCR技术,使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法扩增出整合形式的HBV基因片段及其侧翼的人基因组DNA片段,建立克隆整合的HBVDNA及其相邻的细胞基因序列的PCR技术。PCR产物送生物公司测序,所获结果经美国国家生物技术信息中心（national center forbiotechnology information NCBI）BLAST及MapViewer检索确定HBV整合在染色体上的精确位置。结果24份例HBsAg阳性的肝癌组织中,通过HBV-PCR方法几乎均能检测到HBV的X区和前C区,S区的检测率也达70.8%（17/24）;使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法发现有15份存在HBVDNA整合现象,整合的标本中有11份正向插入宿主基因中,8份反向插入宿主基因中,其中有5份标本既有正向插入也有反向插入,从病毒基因分析,整合可发生于X基因的任何长度,且均以截短形式插入宿主细胞DNA。另有9份标本未测到整合。结论肝细胞癌的发生和HBV DNA的整合密切相关,X基因是HBV基因组中最常发生整合的片段。HBVDNA在肝细胞染色体上的整合呈不均衡分布。
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