复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾病变的防治作用研究

论文摘要

目的:研究复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾病变的防治作用。方法:1.药物制备和含量测定1.1黄连中盐酸小檗碱提取:黄连粗品采用6倍量80%乙醇为溶剂,乙醇中加入0.25%硫酸,提取3次,每次90 min。1.2葛根、枇杷叶、麦冬混合提取:葛根、枇杷叶、麦冬粗品采用8倍量60%乙醇为溶剂,提取3次,每次60min。1.3采用HPLC测定CRCC中盐酸小檗碱的含量:选用C18柱（250mm×4.6mm,5μm）;检测波长263nm:流动相:0.033mol/LKH2PO4-乙腈（48:52）:流速:1.0mL/min;柱温:25℃,进样量为20μL);1.4采用HPLC测定CRCC中葛根素的含量:选用C18柱（250mm×4.6mm,5μ）;检测波长250nm:流动相:甲醇-水（26:74）;流速:1.0mL/min:柱温:30℃,进样量为10μL):2.DN大鼠模型建立、分组及给药:采用文献方法,选取健康Wistar雄性大鼠,体重为180～220g。禁食不禁水12h后,腹腔一次性无菌注射链脲佐菌素（STZ）60mg/kg,72h后眼眶取血测空腹血糖（FBG）,选取血糖值≥11.1mmol/L,尿糖++～+++72只纳入实验。符合条件动物随机均分为6组:模型组、CRCC高剂量组（4.36g/kg,相当于临床人用等效量4倍）、低剂量组（2.18 g/kg,相当于临床人用等效量2倍）、消渴丸组（0.80g/kg相当于临床人用等效量2倍）、盐酸小檗碱+葛根素组（盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg）、依那普利组（10mg/kg）,另设正常对照组8只。除模型组及正常对照组给予0.5%CMC-Na,其余各用药组均采用灌胃给药,一天一次,连续给药8w。3.指标检测:生化分析:FBG、BUN、Scr:放免分析:Ins、C-P、TNF-α、α1-MG、β2-MG:光镜观察:肾小球HE染色;电镜观察:肾脏超微结构;免疫组化检测:肾皮质Bcl-2、Bax、VEGF蛋白表达:RT-PCR检测:肾皮质Bcl-2、Bax、VEGF mRNA表达:其他:体重、肾重、一般状态。结果:模型组大鼠FBG、Scr、BUN、TNF-α、α1-MG、β2-MG水平显著升高,体重、Ins和C-P水平显著降低,光镜下可观察到模型组大鼠的肾小球细胞出现空泡样变,细胞外基质增多,毛细血管攀数量减少,肾小管肿胀。电镜下进一步观察到肾小球细胞基底膜增厚,足突融合,胞内线粒体出现退化性变,染色质出现边集现象。肾皮质Bcl-2蛋白和mRNA的表达降低,Bax、VEGF蛋白和mRNA的表达升高。上述结果提示,本实验成功制备了大鼠糖尿病肾病早期模型。与模型组比较,CRCC及其他各给药组能显著降低大鼠FBG、Scr、BUN、TNF-α、α1-MG、β2-MG水平,升高体重、Ins和C-P水平。光镜下观察,大鼠的肾小球细胞空泡样变程度减轻,细胞外基质堆积减少,开放的毛细血管数量增多,肾小管轻微肿胀。电镜下进一步观察到肾小球细胞基底膜增厚和足突融合程度减轻,线粒体轻度肿胀。肾皮质Bcl-2蛋白和mRNA的表达升高,Bax、VEGF蛋白和mRNA的表达降低。结论:1.CRCC（2.18、4.36g/kg）,盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg,消渴丸（0.80g/kg）能够降低DN大鼠的FBG、升高Ins、C-P。2.CRCC（2.18、4.36g/kg）,盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg,消渴丸（0.80g/kg）,依那普利（10mg/kg）能够降低DN大鼠Scr、BUN、α1-MG、β2-MG和肾重体重比值水平,改善肾功能。3.病理观察提示CRCC（2.18、4.36g/kg）,盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg,消渴丸（0.80g/kg）,依那普利（10mg/kg）能够不同程度的促进DN大鼠肾小球结构逐步恢复和改善,保护肾脏超微结构。4.RT-PCR结果提示CRCC（2.18、4.36g/kg）,盐酸小檗碱精制品200 mg/kg+葛根素150 mg/kg,消渴丸（0.80g/kg）,依那普利（10mg/kg）能够不同程度抑制肾皮质Bax、VEGF蛋白和mRNA表达,促进Bcl-2蛋白和mRNA表达。以上实验结果综合表明,CRCC对早期DN具有防治作用,能够延缓DN进程。

论文目录

• 一、英文缩略词表
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、正文
• 实验一 复方黄连胶囊的制备及含量测定
• 1 前言
• 2 材料
• 3 药物制备
• 4 含量测定
• 5 结论
• 实验二 复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾病变的防治作用研究
• 1 前言
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4.数据处理
• 5 结果
• 6 讨论
• 7 小结
• 参考文献
• 五、致谢
• 六、附录
• 七、综述及参考文献