原发性肝细胞癌中JAK1基因的突变分析

论文摘要

为了分析和探讨JAK1基因的改变与肝细胞癌发生的关系,本研究采用常规苯酚—氯仿方法提取肝癌细胞和同一患者正常肝细胞基因组DNA。经过对JAK1基因有报道可能突变的12个外显子进行引物设计后,经聚合酶链反应（PCR）分别扩增,引物设计在内含子中以确保扩增片段包含整个外显子和内含子与外显子的剪接位点。所得PCR产物经加热变性为单链,于聚丙烯胺凝胶中电泳,进行单链构象多态性分析（Single strand conformational polymorphism,SSCP）,经放射自显影观察。最后将PCR-SSCP发现有异常的PCR产物扩增纯化后进行DNA序列测定,确定碱基改变类型。实验以正常肝细胞DNA最为对照。结果显示:在12个肝癌细胞系中没有发现突变基因,而发现在编号为#33的病例肿瘤样品DNA对此野生型DNA样品表现出异常条带。对其测序证实,该病例在外显子13上发生了两个碱基的改变:2008G＞T,Q646V;2009G＞T,H647F。同时我们也发现JAK1基因外显子14的单核苷酸多态性现象（Single nucleotidepolymorphism;SNP）的高发频率现象（14%）。由此可以认为,由于JAK1的突变频率为1.2%,比较低,因此并不能确定,JAK1基因的突变与肝癌发生的关系,该研究也发现SNP的发生率较高,并且有趣的是,编号为#2和#148的样品同时在外显子5和外显子10上都有SNP现象。这可能与肝癌的发生有一定的联系,进一步的研究或许能揭开其中的机制。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语
• 主要仪器和设备
• 主要试剂及配制
• 一、细胞培养试剂
• 二、真核细胞基因组DNA提取试剂
• 三、PCR反应试剂
• 四、琼脂糖凝胶电泳试剂
• 五、单链构象多态性检测（single strand conformation polymorphism;SSCP）试剂
• 六、DNA扩增样品纯化试剂
• 前言
• 材料和方法
• 一、实验材料
• （一） 肝癌细胞系
• （二） 人肝细胞癌组织标本
• 二、实验方法
• （一） 肝癌细胞系的培养
• （二） 肝癌细胞系中DNA的提取
• （三） 肝癌细胞组织标本DNA的提取
• （四） PCR扩增
• （五） 琼脂糖凝胶电泳
• （六） 单链构象多态性检测（SSCP）
• （七） 对有异常条带DNA样品的扩增与纯化
• （八） 序列分析
• 结果
• 一、引物退火温度的测定
• 二、单链构象多态性检测（SSCP）
• 三、序列分析
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 硕士在读阶段发表的论文
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢