本文主要研究内容
作者宋博雅（2019）在《RNA原位检测技术的开发及其在lncRNA检测中的应用》一文中研究指出：RNA表达具有高度异质性,准确检测RNA的表达丰度和空间位置能够了解不同时期细胞和组织中各基因动态表达情况,并可以更好地理解机体成分间的作用机制。本研究旨在开发一种利用双连接探针对目标基因的表达进行定量定位分析的新型单分子RNA原位检测技术,并更高效地应用构建空间基因表达谱。在锁式探针和滚环扩增的基础上,本研究主要创新在于设计新型探针-双连接探针,通过考察验证双连接探针的设计原则,测试比较检测效率,并将其应用到不同种类RNA的检测,建立了利用双连接探针基于滚环扩增的RNA原位检测的方法。首先以ACTB管家基因为模型,类比锁式探针检测反应,通过优化逆转录、双连接探针第一步连接和基于夹板的成环反应体系,建立基于双连接探针的RNA原位检测基本方法。比较双连接探针与锁式探针的方法,得出双连接探针检测效率高于锁式探针。然后将此方法扩展到其他mRNA的检测,以在细胞爬片和病理组织切片中检测KRAS和乳腺癌相关基因为例,考察方法的特异性和稳健性。而后将方法应用到癌细胞lncRNA的多重检测和mRNA与lncRNA的同时检测,再次证明方法的稳健性。检测lncRNA SNP位点时,通过改变探针设计、清洗条件、连接酶和反应体系,可使假阳性率降低到1%以下。本文通过双连接探针与锁式探针多次比较实验,验证本方法更加高效。同时又通过SNP位点的检测实验,实现了较高的单碱基识别特异性。此方法可以结合多种原位测序技术,实现在单细胞、单分子、单碱基水平上的RNA高度多重基因表达原位检测。由于原位检测结果与临床信息的一致性,本方法优化后有望成为应用于基础研究和临床诊断的新技术。
Abstract
RNAbiao da ju you gao du yi zhi xing ,zhun que jian ce RNAde biao da feng du he kong jian wei zhi neng gou le jie bu tong shi ji xi bao he zu zhi zhong ge ji yin dong tai biao da qing kuang ,bing ke yi geng hao de li jie ji ti cheng fen jian de zuo yong ji zhi 。ben yan jiu zhi zai kai fa yi chong li yong shuang lian jie tan zhen dui mu biao ji yin de biao da jin hang ding liang ding wei fen xi de xin xing chan fen zi RNAyuan wei jian ce ji shu ,bing geng gao xiao de ying yong gou jian kong jian ji yin biao da pu 。zai suo shi tan zhen he gun huan kuo zeng de ji chu shang ,ben yan jiu zhu yao chuang xin zai yu she ji xin xing tan zhen -shuang lian jie tan zhen ,tong guo kao cha yan zheng shuang lian jie tan zhen de she ji yuan ze ,ce shi bi jiao jian ce xiao lv ,bing jiang ji ying yong dao bu tong chong lei RNAde jian ce ,jian li le li yong shuang lian jie tan zhen ji yu gun huan kuo zeng de RNAyuan wei jian ce de fang fa 。shou xian yi ACTBguan jia ji yin wei mo xing ,lei bi suo shi tan zhen jian ce fan ying ,tong guo you hua ni zhuai lu 、shuang lian jie tan zhen di yi bu lian jie he ji yu ga ban de cheng huan fan ying ti ji ,jian li ji yu shuang lian jie tan zhen de RNAyuan wei jian ce ji ben fang fa 。bi jiao shuang lian jie tan zhen yu suo shi tan zhen de fang fa ,de chu shuang lian jie tan zhen jian ce xiao lv gao yu suo shi tan zhen 。ran hou jiang ci fang fa kuo zhan dao ji ta mRNAde jian ce ,yi zai xi bao pa pian he bing li zu zhi qie pian zhong jian ce KRAShe ru xian ai xiang guan ji yin wei li ,kao cha fang fa de te yi xing he wen jian xing 。er hou jiang fang fa ying yong dao ai xi bao lncRNAde duo chong jian ce he mRNAyu lncRNAde tong shi jian ce ,zai ci zheng ming fang fa de wen jian xing 。jian ce lncRNA SNPwei dian shi ,tong guo gai bian tan zhen she ji 、qing xi tiao jian 、lian jie mei he fan ying ti ji ,ke shi jia yang xing lv jiang di dao 1%yi xia 。ben wen tong guo shuang lian jie tan zhen yu suo shi tan zhen duo ci bi jiao shi yan ,yan zheng ben fang fa geng jia gao xiao 。tong shi you tong guo SNPwei dian de jian ce shi yan ,shi xian le jiao gao de chan jian ji shi bie te yi xing 。ci fang fa ke yi jie ge duo chong yuan wei ce xu ji shu ,shi xian zai chan xi bao 、chan fen zi 、chan jian ji shui ping shang de RNAgao du duo chong ji yin biao da yuan wei jian ce 。you yu yuan wei jian ce jie guo yu lin chuang xin xi de yi zhi xing ,ben fang fa you hua hou you wang cheng wei ying yong yu ji chu yan jiu he lin chuang zhen duan de xin ji shu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自华侨大学的宋博雅，发表于刊物华侨大学2019-10-31论文，是一篇关于原位检测论文,滚环扩增论文,双连接探针论文,华侨大学2019-10-31论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自华侨大学2019-10-31论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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