论文摘要
第一部分: 人类 sIL-6R 基因的克隆与序列分析 目的: 从地塞米松刺激的人肝癌细胞系 HepG2 细胞中克隆人类sIL-6R 基因,为下一步构建融合基因 Hyper-IL-6 打下基础。 方法:以地塞米松刺激的 HepG2细胞提取的总 RNA 为模板,设计合成扩增人类 sIL-6R 基因的特异性引物,进行 RT-PCR 反应。应用胶回收法纯化目的基因,目的基因定向克隆至载体 pIRES2-EGFP,构建重组质粒 pIRES-R。将测序结果应用 DNAssist 2.0 软件,与已知 GenBank 中的 IL-6R 序列进行同源性比较分析。 结果: 序列分析结果表明,本实验所克隆片段长 969bp,包含人类IL-6R 基因的前 323 个氨基酸。同源性分析表明与 GenBank 中所报道的sIL-6R 基因序列仅有两个碱基不同。 结论:我们成功克隆了人类 sIL-6R 基因,同源性分析表明,可以以此为模板,构建融合基因 Hyper-IL-6。 sIL-6R;基因;基因克隆 Hyper-IL-6;绿色荧光蛋白;真核细胞;表达
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