TTV抗原ORF1的基因克隆及原核表达

论文摘要

研究背景及目的：肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，目前已发现和确认的肝炎病毒有甲、乙、丙、丁、戊、庚型。1997年底日本学者Nishizawa运用代表性差异技术（Reprentational difference analysis）从一名非甲-庚型肝炎病人（TTV）的血清中发现了输血传播病毒（Transfusion transmitted virus，TTV）。TTV基因组为单股线状DNA，目前已测定的核苷酸序列长约3.8kb，有两个开放读码框架（ORF），ORF1位于该基因组的589-2898位核苷酸，编码770个氨基酸，ORF2位于107-712位核苷酸，编码202个氨基酸；ORF1可能编码病毒的结构蛋白，ORF2可能编码病毒的非结构蛋白；可以通过垂直传播，生物学特征与某些动物单链DNA病毒（微小病毒B19）相似。TTV的基因分型从已报道的TTV DNA部分基因序列来看，TTV DNA具有高度变异性，采用聚合酶链反应（PCR）检测血清TTV DNA是诊断TTV感染的主要手段。目前还未证实TTV感染引起肝损伤和影响肝功能，但TTV可引起ALT升高，出现病毒血症，并且在局部地区爆发性流行，同时TTV常和HBV及HCV共同感染。TTV在非甲至非庚型肝炎患者中的感染率较高，可能是非甲至非庚型肝炎的主要致病因子，现国内对TTV的研究资料还很缺乏，本实验的意义在于将TTV-ORF1 DNA构建原核表达载体并获得高效表达，为TTV的ELISA检测和疫苗的抗原研究提供基础。 方法：从TTV病毒感染者外周血中提取DNA，用PCR从中扩增出目的基因，酶切PCR扩增产物并进行纯化获得TTV-ORF1 DNA，插入载体pGEM-T Easy中，转化JM109感受态细菌中，随受体菌的生长繁殖，重组DNA分子得以复制扩增；运用

论文目录

• 论文 TTV抗原ORF1的基因克隆及原核表达
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述 TTV及其研究进展
• 参考文献
• 缩略语
• 致谢