甘蓝型油菜PEP基因片段的克隆和种子特异性反义表达载体的构建及转基因油菜的获得

甘蓝型油菜PEP基因片段的克隆和种子特异性反义表达载体的构建及转基因油菜的获得

论文摘要

油菜是最重要的油料作物之一,也是我国的主要经济作物,在国民经济中占有重要地位。其油主要食用,其饼粕主要用于饲料。近年来人们对油菜的品质不断改良,并且菜籽油也大量应用于化工、能源领域,转基因油菜也用来生产生物柴油的原料等。由于油菜用途的不断拓展,对其研究也不断深入。近年来,利用基因工程手段,提高种子的含油量,增加其经济价值,成为研究的重要目标。丙酮酸羧化酶(PEP)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶,抑制PEP基因的表达,可提高种子的含油量。本研究利用PCR法从甘蓝型油菜花油5号(H045)克隆了PEP基因片段,与种子特异性表达载体pBI121-B构建了反义PEP基因的种子特异性植物表达载体,;并以甘蓝型油菜花油5号(H045)为材料,利用激光微束穿刺法将其转化到甘蓝型油菜中,通过卡那抗性和PCR方法鉴定,获得了转基因植株。本研究利用激光微束穿刺法将外源基因成功导入油菜中,克服了油菜农杆菌转化存在的众多问题,诸如转化频率低,重演性差,基因型限制等,这为通过基因工程新技术,大幅度提高油菜种子的含油量提供了一个新途径,丰富了油菜高油育种理论。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 一、生物柴油的国际利用现状
  • 二、低芥酸菜油为原料所制取的生物柴油是矿物柴油的良好替代品
  • 三、油菜是我国发展生物柴油最理想的原料来源
  • 四、基因调控提高种子含油量的研究策略与国内外研究现状
  • 五、种子特异性表达启动子的选用
  • 六、反义技术的原理与应用
  • 七、微束激光穿刺法转基因油菜
  • 第二章 材料与方法
  • 2.1 材料
  • 2.2实验方法
  • 第三章 结果与分析
  • 3.1种子特异性反义表达载体的构建
  • 3.2 油菜下胚轴的质壁分离时间
  • 3.3 利用激光微束穿刺法将GFP基因导入油菜
  • 3.4 转基因植株的筛选
  • 第四章 讨论与结语
  • 4.1 讨论
  • 4.2 结语
  • 参考文献
  • 在读期间研究成果
  • 致谢
  • 相关论文文献

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