猫爪草皂苷对大肠癌增殖和凋亡的影响及其机制研究

论文摘要

一、研究目的、内容和意义1研究整理文献,寻找其病因病机和防治方药的脉络和规律,分析古今用药规律及各自特点,探求有效的防治途径和方法。2体外实验中,从Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达,对皂苷调控LoVo细胞凋亡作一探讨。3探讨猫爪草皂苷对移植性结肠癌小鼠模型（CT-26）的抗肿瘤作用及其诱导凋亡的相关机理。二、研究结果1文献研究1.1病因病机古代医家认为主要有饮食因素、起居不节、感受外邪、先天因素、情志因素等,且多数赞同本病是多种因素共同作用的结果。现代医家发展了大肠癌的病因病机理论,认为主要包括气滞学说、血瘀学说、热毒学说、湿聚学说、正气虚弱学说。1.2治法方药古代主要有补益虚损、理气活血、清热解毒、收涩止血、通下等法。今人则以清热解毒为主,温下法使用较少。古今用药各有侧重。补益虚损是古今医家在论治时均认识到的重要方法;今人治疗大肠癌,清热药占绝对优势,且温里药与古人用药相比有明显下降。2实验研究2.1猫爪草皂苷对人结肠癌细胞LoVo增殖呈明显抑制作用,且随药物浓度的提高和作用时间的延长而增强,500μg/mL72h其对LoVo抑制率为81.52%。2.2猫爪草皂苷作用人结肠癌细胞LoVo后,在荧光显微镜观察到细胞凋亡的特征形态改变,在流式图上各浓度组均见有亚二倍体峰的出现。24h出现DNA ladder。2.3猫爪草皂苷作用24h后,LoVo细胞Bax蛋白水平明显增高,而Bcl-2出现抑制,且呈浓度依赖性,皂苷组Bcl-2/Bax比例下降。Caspase-3蛋白水平随浓度明显升高。2.4猫爪草皂苷对小鼠移植性肿瘤CT-26有显著抑制作用。在本实验剂量范围内出现明显量效关系,其中最大剂量平均抑瘤率分别为39.97%,同时对荷瘤小鼠CT-26免疫器官胸腺、脾脏指数均有增加,NK细胞活性上升。Bax、Caspase-3蛋白水平明显升高,Bcl-2/Bax比值显著下降。三、研究结论1防治思路在于防治并举,防重于治;标本兼顾,祛邪寓扶正之中;以通为要,辨寒温各施温下、寒下;宜重视温下法的合理运用。2寒毒积滞是大肠癌类病证的主要病机之一。勿轻温热,重寒凉。温下法是治疗大肠癌的有效思路及方法。3猫爪草皂苷具有显著抑制人结肠癌LoVo细胞生长、诱导其凋亡的作用,具有时间、剂量依赖关系。猫爪草皂苷阻滞细胞周期,抑制肿瘤的生长。4猫爪草皂苷可降低人结肠癌LoVo细胞Bcl-2表达,增加Bax、Caspase-3表达。猫爪草皂苷可能通过压力诱导的途径,激活凋亡执行器Caspase-3诱导凋亡。5猫爪草皂苷抑制小鼠CT-26肿瘤的生长和诱导小鼠结肠癌细胞凋亡,其机理可能是下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一部分 文献研究
• 1 大肠癌文献记载
• 2 病因病机
• 2.1 古代医家对大肠癌病因病机的认识
• 2.2 现代对大肠癌病因病机的认识
• 3 大肠癌防治方药
• 3.1 古代防治方药
• 3.2 现代防治大肠癌方药
• 3.2.1 辨证分型治疗
• 3.2.2 辨病分期治疗
• 3.2.3 基本方加减治疗
• 3.2.4 中药制剂治疗
• 3.2.5 单偏验方治疗
• 4 中医防治大肠癌的基本思路
• 4.1 防治并举,防重于治
• 4.2 标本兼顾,祛邪寓扶正之中
• 4.3 以通为要,辨寒温各施温下、寒下
• 4.4 习古鉴今,重视温下法的合理运用
• 5 结语
• 参考文献
• 第二部分 文献综述
• 综述1 结直肠癌中药药理学研究现状
• 1 促进肿瘤细胞凋亡
• 2 抑制肿瘤细胞增殖和诱导分化
• 3 抑制肿瘤细胞粘附、侵袭和转移
• 4 抑制肿瘤新生血管形成
• 5 提高机体免疫功能
• 6 逆转肿瘤细胞多药耐药性（MDR）
• 7 展望
• 参考文献
• 综述2 猫爪草药理研究概况
• 1 抗结核菌
• 2 抗肿瘤
• 3 免疫活性
• 4 镇咳、祛痰、消炎作用
• 5 保护性抑制作用
• 6 毒性及其它
• 参考文献
• 第三部分 实验研究
• 实验1 猫爪草皂苷抑制大结肠癌LoVo细胞增殖的研究
• 1 材料
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 细胞株
• 1.4 实验药物
• 1.5 细胞培养液及相关溶液的配制
• 2 方法
• 2.1 细胞复苏、培养、传代和冻存
• 2.1.1 细胞复苏
• 2.1.2 细胞培养
• 2.1.3 细胞传代
• 2.1.4 细胞冻存
• 2.2 倒置显微镜观察
• 2.3 AO/EB荧光染色观察
• 2.3.1 原理
• 2.3.2 方法
• 2.4 Hoechst33258荧光染色观察
• 2.4.1 原理
• 2.4.2 实验步骤
• 2.5 四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察细胞生长的影响
• 2.5.1 原理
• 2.5.2 方法
• 2.6 流式细胞仪检测猫爪草皂苷对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的影响
• 2.6.1 原理
• 2.6.2 方法
• 2.7 细胞DNA琼脂糖凝胶电泳
• 2.7.1 原理
• 2.7.2 方法
• 2.8 统计学分析
• 3 结果
• 3.1 倒置显微镜观察
• 3.2 荧光倒置显微镜荧光染色观察
• 3.2.1 AO/EB荧光染色观察
• 3.2.2 Hoechst33258荧光染色观察
• 3.3 MTT法观察猫爪草皂苷对人结肠癌LoVo细胞生长的影响
• 3.4 流式细胞仪检测猫爪草皂苷对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的影响
• 3.5 细胞DNA琼脂糖凝胶电泳
• 4 讨论
• 参考文献
• 实验2 猫爪草皂苷对人结肠癌LOVO细胞凋亡影响的机制研究
• 1 实验材料
• 1.1 主要仪器和设备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 细胞株
• 1.4 实验药物
• 2 方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 免疫细胞化学测定凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3的表达变化
• 2.2.1 原理
• 2.2.2 方法
• 2.2.3 图像分析
• 2.3 统计学分析
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 实验3 猫爪草皂苷对CT-26荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究
• 1 实验材料
• 1.1 主要仪器和设备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 实验动物和细胞株
• 1.4 实验药物
• 2 方法
• 2.1 分组、造模与给药
• 2.2 猫爪草皂苷对荷瘤小鼠体重的影晌
• 2.3 猫爪草皂苷对小鼠种植瘤生长抑制作用
• 2.4 猫爪草皂苷对荷瘤小鼠免疫器官的影响
• 2.5 NK细胞活性的影响
• 2.5.1 靶细胞的传代
• 2.5.2 脾细胞悬液的制备（效应细胞）
• 2.5.3 NK细胞活性检测
• 2.6 血常规和肝、肾功能检测
• 2.7 免疫组织化学测定凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3的表达变化
• 2.7.1 组织处理
• 2.7.2 5μm厚连续切片
• 2.7.3 免疫组化染色步骤
• 2.7.4 图像分析
• 2.8 统计学分析
• 3 结果
• 3.1 猫爪草皂苷对荷瘤小鼠体重的影响
• 3.2 猫爪草皂苷对小鼠种植瘤生长抑制作用
• 3.3 猫爪草皂苷对荷瘤小鼠免疫器官的影响
• 3.4 NK细胞活性的影响
• 3.5 猫爪草皂苷对荷瘤小鼠血常规和肝、肾功能的影响
• 3.6 免疫组织化学测定凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3的表达变化
• 4 讨论
• 参考文献
• 结论及展望
• 1 主要结论
• 2 创新点
• 3 展望
• 致谢
• 作者简介