流动化学发光法在临床检验及药物分析中的应用研究

论文摘要

本文综述部分简要介绍了化学发光分析的基本情况、发展以及应用。流动化学发光分析法具有仪器设备简单、分析速度快、灵敏度高、线性范围宽等优点,越来越受到分析化学工作者的重视。药物分析在临床、药代动力学及药物开发研究中具有重要的地位,将化学发光用于药物和临床分析不仅具有理论意义,而且还有重要的实用价值。本文就药物盐酸倍他司汀和盐酸伊托必利对发光体系的作用进行了研究,对发光机理进行了探讨;基于鲁米诺一过氧化氢体系的化学发光现象;以血红蛋白作为酶催化剂,联用流动注射等技术,建立了测定甘油三酯、胆固醇的流动注射化学发光分析法。研究报告包括以下四个部分:1.实验发现盐酸倍他司汀对鲁米诺-高碘酸钾发光体系具有后化学发光作用,文中对其作用机理进行了探讨及快速测定。结合流动注射技术,优化反应条件,建立了测定盐酸倍他司汀的新方法,该方法简便、快速、准确,线性范围为2.0×10-7-4.0×10-4mol/L（r=0.9975）,检出限为1.0×10-7mol/L;对4.0×10-5mol/L的盐酸倍他司汀进行了11次平行测定,相对标准偏差为2.9%。并据此成功用于片剂中盐酸倍他司汀含量的测定,结果令人满意。2.基于盐酸伊托必利与重铬酸钾在酸性介质中发生氧化还原反应,产生的铬（Ⅲ）能催化鲁米诺-H2O2化学发光体系的,且发光强度与盐酸伊托必利的浓度在一定范围内呈线性关系。据此,结合流动注射技术,优化反应条件,建立了一种高灵敏度的测定盐酸伊托必利的新方法。该方法的线性范围为1.0×10-11-1.0×10-9mol/L（r=0.9923）,检出限为2.0×10-12mol/L;对1.65×10-10mol/L的盐酸伊托必利进行了11次平行测定,相对标准偏差为2.5%。3.基于甘油三酯在脂肪酶的催化作用下水解生成甘油,甘油在甘油激酶催化作用下生成甘油-3-磷酸,甘油-3-磷酸在磷酸甘油氧化酶的作用下释放出过氧化氢,利用血红蛋白（Hb）模拟酶催化过氧化氢-鲁米诺的化学发光体系,结合流动注射技术,建立了血红蛋白催化化学发光法联用流动注射技术测定人体血清中的甘油三酯的新方法,并将该法用于血清中甘油三酯含量的测定,测定结果令人满意。该法线性范围为2.26×10-4-2.26×10-6mol/L（r=0.9955）,检出限为7.5×10-7mol/L。4.利用溶胶凝胶固定化酶技术分别固定了胆固醇脂酶和胆固醇氧化酶,并制成固定化酶柱;胆固醇脂在胆固醇脂酶的催化作用下生成胆固醇,胆固醇在胆固醇氧化酶的催化作用下释放出的过氧化氢在血红蛋白的催化作用下,与发光试剂鲁米诺反应,产生较强的化学发光,并结流动注射技术。由此建立了固定化酶-酶促反应偶合化学发光联用流动注射技术测定胆固醇的新方法。本文对其标准品进行了实验,发现其浓度与发光值在一定范围内呈良好的线性关系,总胆固醇的线性范围为2.02×10-4-1.01×10-6mol/L（r=0.9975）,检出限为3.5×10-7mol/L;游离胆固醇的线性范围为2.18×10-5-5.0×10-8mol/L（r=0.9991）,检出限为5.0×10-9mol/L;并对人血清中胆固醇进行了测定,与传统的酶法分析结果进行分析对比,发现此两种方法的测定结果无显著性差异。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 综述
• 1.1 引言
• 1.1.1 化学发光分析法原理
• 1.1.2 常见化学发光体系及其应用
• 1.2 流动注射分析
• 1.3 流动注射化学发光分析
• 1.3.1 流动注射化学发光分析概述
• 1.3.2 流动注射化学发光分析机理的研究
• 1.4 酶联化学发光
• 1.4.1 酶的概述
• 1.4.2 固定化酶技术
• 1.4.3 过氧化物酶及过氧化物模拟酶
• 1.4.4 酶联化学发光的研究
• 1.5 化学发光法的研究进展
• 1.5.1 新化学发光体系和新型发光试剂的研究
• 1.5.2 纳米材料表面化学发光研究
• 1.5.3 分子印迹技术在化学发光分析中的应用研究
• 1.5.4 化学发光显微成像技术的研究
• 1.5.5 试验装置的微型化、集成化和专一化
• 1.5.6 其它技术在化学发光分析中的应用
• 参考文献
• 第2章 盐酸倍他司汀对鲁米诺—高碘酸钾体系后发光作用机理的探讨及其快速测定
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 仪器及试剂
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 化学发光反应的动力学性质
• 2.3.2 作用机理的探讨
• 2.3.3 条件优化实验
• 2.3.4 工作曲线、精密度及检出限
• 2.3.5 干扰实验
• 2.3.6 样品分析
• 2.3.7 小结
• 参考文献
• 第3章 流动偶合化学发光法测定盐酸伊托必利
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 仪器及试剂
• 3.2.2 实验方法
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 化学发光反应的动力学性质
• 3.3.2 条件优化实验
• 3.3.3 工作曲线、精密度及检出限
• 3.3.4 干扰实验
• 3.3.5 样品分析
• 3.3.6 小结
• 参考文献
• 第4章 血红蛋白催化化学发光反应联用流动注射技术测定甘油三酯
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 仪器及试剂
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 流路设计
• 4.3.2 过氧化物酶的选择
• 4.3.3 测定条件的优化及选择
• 4.3.4 甘油三酯的测定
• 4.3.5 干扰实验
• 4.3.6 样品的测定
• 4.3.7 小结
• 参考文献
• 第5章 固定化酶柱流动化学发光法测定血清中的胆固醇
• 5.1 引言
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 仪器及试剂
• 5.2.2 实验方法
• 5.2.3 固定化酶柱的制备
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 流路设计
• 5.3.2 测定条件的选择
• 5.3.3 胆固醇的测定
• 5.3.4 干扰实验
• 5.3.5 样品的测定
• 5.3.6 差异性分析
• 5.3.7 小结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果