论文摘要
反应器是生物人工肝(Bioartificial liver, BAL)系统的核心部分，其性能直接关系到人工肝支持的效率和效果。由于同种肝细胞、肝细胞株和肝干细胞分别存在来源困难、安全隐患和研究欠深入等问题，故培养异种肝细胞的中空纤维反应器成为BAL研究的主要方向。聚砜膜具有良好的热稳定性、耐氧化性、机械加工性，但是其对肝细胞的粘附性及对肝细胞功能发挥的影响尚不清楚。生物反应器膜材料的性能、适合于BAL的细胞培养方式、中空纤维反应器的性能都是BAL研究中需要解决的问题。 本实验观察原代乳猪肝细胞在聚砜膜界面生长的形态，检测聚砜膜生物界面对乳猪肝细胞的合成功能和生物转化功能的影响，以评价聚砜膜是否为良好的反应器膜材料；应用磁力搅动法进行乳猪肝细胞多细胞聚集体的培养，观察多细胞聚集体的形态和功能，探索适合于BAL的细胞培养方式；采用聚砜膜中空纤维反应器构建生物反应器实验系统，观察乳猪肝细胞多细胞聚集体接种到反应器的生长情况和功能变化及该系统对重型肝炎病人血浆(Severe hepatitis plasma, SHP)的影响，以评价聚砜膜中空纤维反应器的性能。实验方法和结果如下： 一、乳猪肝细胞在聚砜膜生物界面生长的研究 观察乳猪肝细胞在聚砜膜生物界面的生长情况，检测其白蛋白合成、尿素合成、氯化铵清除、酶漏出量的情况，并与乳猪肝细胞在聚苯乙烯界面生长的情况进行对比分析。形态观察显示，在聚砜膜界面生长的乳猪肝细胞形态规整，大小均一，呈球型粘附、铺展，形成多细胞聚集体。在培养过程中，聚砜膜上生长的肝细胞白蛋白合成率、尿素合成率和氨清除率均优于聚苯乙烯界面生长的乳猪肝细胞，聚砜膜和聚苯乙烯两组的乳猪肝细胞LDH和AST漏出量在低水平波动，两组肝细胞的LDH、AST含量无显著性差异。 二、磁力搅动法培养乳猪肝细胞多细胞聚集体的观察 将新分离的乳猪肝细胞悬液放入平底烧瓶中，利用磁力搅拌器和搅拌子，进行多细胞聚集体的磁力搅动培养，计算多细胞聚集体的形成率、贴壁率，观察多细胞聚集体的形态，检测多细胞聚集体的白蛋白合成量、尿素合成量、酶漏出量等指标。在培养过程中，多细胞聚集体形成率随时间的延长而上升，贴壁率随时间的延长而下降，
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