低强度脉冲超声波促进SD大鼠胫骨骨折愈合中PDGF、IGF-I基因表达的实验研究

论文摘要

目的:探索低强度脉冲超声波促进骨折愈合的作用机制,为超声波促进骨折愈合提供分子及基因水平的理论依据,对临床上大量的骨折及骨折不愈合的治疗具有重要的意义。方法:本研究采用单侧大鼠胫骨制作闭合骨折模型。共40只SD大鼠,造模型成功后随机分为A、B两组,每组各20只,各组分为四个亚组,每亚组5只,共40个标本。A组为实验组,骨折并治疗,骨折处每日行超声刺激;B组为对照组,仅骨折,不做任何的治疗。于术后4、7、14、21天依次取A、B各组的亚组骨折处骨痂及纤维组织,进行骨痂厚度的测量和组织学观察。通过免疫组化方法测量积分光密度值研究及PDGF及IGF-I的表达,通过RT-PCR方法半定量分析PDGF及IGF-I mRNA的表达规律。结果:1.术后14、21天实验组骨痂量及厚度明显高于对照组（p＜0.05）。2.HE染色显示成软骨细胞及成骨细胞的提早出现而且量多,软骨内细胞外基质合成增加。3.PDGF的表达于术后4～14天明显高于对照组,主要是促进早期软骨细胞成熟和软骨内成骨（p＜0.05）。4.IGF-I的表达于术后7、14天含量明显高于对照组（p＜0.05）。分布于幼稚、成熟软骨细胞以及成骨细胞,使软骨内成骨细胞增加,增加新骨成骨细胞的含量。结论:1.本实验研究表明采用万能力学试验机制作闭合骨折模型可作为一种新的实验性闭合骨折造模方法。2.低强度脉冲超声波可使骨痂局部PDGF升高,促进早期软骨细胞成熟和软骨内成骨。3.低强度脉冲超声波一方面通过增加软骨细胞数量,使软骨内细胞外基质蛋白合成增加;另一方面通过使局部PDGF生成增加,促进IGF-I的表达,使软骨内成骨增强。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 略缩词表
• 第一章 前言
• 第二章 实验方法和结果
• 第一部分 IGF-I、PDGF的HE染色和免疫组化染色
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物及分组
• 1.2 主要实验试剂及仪器
• 2 鼠右后肢胫骨骨折模型的建立
• 2.1 建模方式
• 2.2 建模后处理及标本采集
• 3 观测指标
• 3.1 一般情况
• 3.2 X线片观察
• 3.3 组织形态学计量
• 3.4 组织学观察
• 4 统计学分析
• 5 结果
• 5.1 一般情况
• 5.2 体重比较
• 5.3 X线观察
• 5.4 组织形态学计量结果
• 5.5 组织学观察
• 5.6 免疫组化检查
• 第二部分 IGF-I、PDGF基因mRNA的表达
• 1 实验材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 引物设计及合成
• 2.2 总RNA的提取
• 2.3 逆转录
• 2.4 PCR扩增
• 2.4.1 扩增方案
• 2.4.2 PCR反应条件
• 2.4.3 PCR扩增条件的优化
• 3 统计学分析
• 4 结果
• 4.1 组织总RNA的质量
• 4.2 PCR反映循环数的确定
• 4.3 退火温度的选择
• 4.4 IGF-I和PDGF的RT-PCR结果
• 第三章 讨论
• 一、实验性动物骨折模型的建立
• 二、骨折愈合过程中细胞因子的作用
• 三、超声波的临床应用
• 四、低强度超声波作用下骨折处组织形态学、生长因子基因变化
• 本实验的不足之处
• 第四章 结论
• 参考文献
• 第五章 附图
• 综述:
• 低强度超声波促进骨折愈合的研究进展
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表的学术论文