论文摘要
目的:探讨转染新型自杀基因YCD 的T 淋巴细胞其体外功能及对前体药物的敏感性,为其防治GVHD 提供理论依据。方法:①脂质体法转染瞬时包装细胞293T 制备含自杀基因YCD 的逆转录病毒;②将逆转录病毒导入T 细胞,并进行筛选、扩增,获得转基因T 细胞;③应用PCR 方法检测转基因T 细胞YCD 基因的表达,ELISA 方法检测细胞因子分泌情况,MTT 法检测其杀伤功能及对前体药物的敏感性。结果:①成功将自杀基因YCD 转入293T 细胞,基因染率可达38.2%;②PCR 方法可检测到转基因T 细胞中YCD 基因的表达; ③筛选出的转基因T 细胞其增殖功能正常,与正常T 细胞相比,对K562 细胞的细胞毒作用无改变,细胞因子分泌功能正常;④体外实验证实转基因T 细胞可被38μmol/L 的前体药物5-FC 全部杀伤。结论:①本实验利用pMSCV-YCD-Puro 载体,成功的将YCD 基因导入人T细胞;②转基因T 细胞的增殖、细胞因子分泌功能及细胞毒作用未受影响;③转基因T 细胞对前体药物敏感,可被高度杀伤。
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