神经酰胺增强卵巢癌顺铂敏感性的作用及其机制研究

论文摘要

目的本研究旨在观察神经酰胺在增强卵巢癌顺铂敏感性的作用及其机制,为筛选有效的卵巢癌顺铂耐药逆转剂提供实验依据。方法本研究采用MTT法测定SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长曲线、顺铂IC50值及不同剂量、不同作用时间下神经酰胺对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用。通过RT-PCR法及Western Blot免疫印迹法检测神经酰胺对SKOV3和SKOV3/DDP细胞Bcl2mRNA及蛋白表达的影响。采用流式细胞技术了解神经酰胺对肿瘤细胞的促凋亡作用。MDC荧光染色法观察神经酰胺对SKOV3、SKOV3/DDP细胞株自噬水平的影响。结果1.细胞呈贴壁式生长,SKOV3细胞倍增时间为33.36小时,SKOV3/DDP细胞倍增时间为42.60小时；SKOV3细胞株顺铂IC50值为3.384μg/ml,SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为13.770μg/ml,耐药倍数为4.07倍。2.同一浓度的神经酰胺,随着用药时间的延长,其对SKOV3、SKOV3/DDP细胞的抑制率逐渐增加；在相同作用时间下,随着药物浓度增加,其对SKOV3、 SKOV3/DDP细胞抑制率也逐渐增加。3. SKOV3细胞Bcl2mRNA表达均低于SKOV3/DDP细胞,本实验共分为Cer5组、Cer10组、Cer20组、Cer40组、Cer5+DDP组、Cer10+DDP组、Cer20+DDP组、Cer40+DDP、顺铂组、对照组十个组,其中SKOV3/DDP细胞Bcl2mRNA表达比SKOV3细胞分别高36.38%、37.33%、43.38%、46.40%、42.05%、44.99%、41.90%、39.17%、43.03%、32.67%。SKOV3细胞中,Bcl2mRNA在各实验组间的表达量不同（F=159.722,P=0.000）,所有组间的表达差异均有统计学意义（P<0.05）。SKOV3/DDP细胞中,Bcl2mRNA在各实验组间的表达量不同（F=182.380,P=0.000）,所有组间的表达差异均有统计学意义（P<0.05）。4. SKOV3细胞Bcl2蛋白表达低于SKOV3/DDP细胞。在以上分组中,SKOV3/DDP细胞Bcl2蛋白比SKOV3细胞分别高40.39%、40.95%、47.63%、44.60%、42.93%、44.73%、43.26%、44.68%、47.48%、35.94%。SKOV3细胞中,Bcl2蛋白在各实验组间的表达量不同（F=104.062,P=0.000）,所有组间的表达差异均有统计学意义（P<0.05）。SKOV3/DDP细胞中,Bcl2蛋白在各实验组间的表达量不同（F=210.458,P=0.000）,所有组间的表达差异均有统计学意义（P<0.05）。5.随神经酰胺浓度及时间的增加,SKOV3、SKOV3/DDP细胞凋亡率逐渐增加。相同作用时间下,不同浓度神经酰胺作用之间凋亡率具有统计学意义（P<0.05）。同一浓度神经酰胺作用下,随药物作用时间延长,凋亡率增加,24小时和48小时之间凋亡率具有统计学意义（P<0.05）。6.经神经酰胺处理后,随药物浓度及时间的增加,SKOV3、SKOV3/DDP细胞胞浆内荧光强度增强,提示细胞自噬水平增强。结论1.神经酰胺能够增强顺铂对卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞体外生长抑制作用,而且这种抑制作用不受卵巢癌顺铂耐药的影响。2.神经酰胺可通过调节卵巢癌细胞Bcl2基因及蛋白表达,诱导细胞凋亡及细胞自噬等途径增强顺铂敏感性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象与方法
• 1 实验对象
• 2 实验方法
• 3. MTT法测定SK0V3和SK0V3/DDP细胞生长曲线、顺拍及神经酰胺对细胞生长的影响
• 4. RT-PCR检测神经酰胺对SKOV3和SK0V3/DDP细胞Bdz mRN A表达的影响
• 2蛋白表达的影响'>5. Western Blot法检测神经酷胺对SK0V3和SKOV3/DDP细胞Bcl₂蛋白表达的影响
• 6. 流式细胞术检测神经酷胺对SKOV3和SKOV3/DDP细胞调亡影响
• 7. 倒置劳光显微镜下观察神经酰胺对SK0V3和SK0V3/DDP细胞内自嗟水平的影响
• 8. 统计学方法
• 结果
• 1 SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长曲线
• 2 神经酰胺对SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长的影响
• 3 神经酰胺对SKOV3和SKOV3/DDP细胞顺铂敏感性的影响
• 2mR-NA表达的影响'>4 神经酰胺对SKOV3和SKOV3/DDP细胞Bcl₂mR-NA表达的影响
• 2蛋白表达的影响'>5 神经酰胺对SKOV3和SKOV3/DDP细胞Bcl₂蛋白表达的影响
• 6 神经酰胺对SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡的影响
• 7 神经酰胺对SKOV3和SKOV3/DDP细胞自噬水平的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述 BNIP3与卵巢癌关系的研究进展
• 综述参考文献
• 致谢