海洋细菌发酵产氨基寡糖素菌种筛选及条件选择研究

论文摘要

采用几丁质选择性培养基富集和平板培养从北海红树林土样中分离出可降解几丁质产生透明水解圈的细菌12株,並从中筛选出一株可降解转化几丁质、产氨基寡糖较好的菌株（HB003,下同）,经对其生物学特性和几丁质转化产氨基寡糖发酵试验,结果表明:该菌株的菌落圆形、湿润、浅黄;大小为0.5×1～2μm,革兰氏染色阴性,无芽孢,单根极生鞭毛,可运动;兼厌气,中温性,生长最适起始pH7.5～8.5,25～35℃,耐盐,16s rDNA序列分析显示,该菌株与弧菌（Vibrio）菌属中多株菌株相似性达99%。其在以几丁质为唯一碳源基质的液体培养基,起始pH 8.5,30℃的条件下静置发酵6 d,可产氨基寡糖153.5 mg/L;经对其产氨基寡糖素发酵条件的优化,试验结果表明:其在配方为:甲壳素10g、蛋白胨5 g、MgSO4·7H2O 0.6g、FeSO40.01g、K2HPO40.9g、KH2PO4 0.6g、NaCl 20 g,蒸馏水1000 mL,pH 8.0的培养基,接种量1%（ν/ν）、在发酵温度30℃、通气量摇瓶转速为120 rpm的条件下发酵生产氨基寡糖素,产量可达到703.5 mg/L.

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 几丁质及几丁质衍生物低聚糖的概述
• 1.2 氨基寡糖（几丁质和壳聚糖的低聚体）的制备方法
• 1.3 酶法制备氨基寡糖的研究进展
• 1.4 氨基寡糖的应用前景
• 1.5 展望
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 菌种来源
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 仪器与试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 氨基寡糖素的测定
• 2.2.2 菌体生长量的测定
• 2.2.3 液体菌种的制备
• 2.2.4 产氨基寡糖素海洋细菌的分离筛选
• 2.2.5 筛选株形态观察
• 2.2.6 筛选菌株的生理试验
• 2.2.7 筛选菌株生长曲线的测定
• 2.2.8 筛选菌株的分子生物学鉴定
• 2.2.9 筛选菌株发酵产氨基寡糖素条件选择
• 第三章 结果与分析
• 3.1 产氨基寡糖素海洋细菌的分离和筛选
• 3.1.1 菌种分离样的采集
• 3.1.2 产氨基寡糖素海洋细菌的富集培养和分离
• 3.1.3 产氨基寡糖素海洋细菌的初筛
• 3.1.4 产氨基寡糖素海洋细菌的复筛
• 3.1.5 筛选菌株HB003的形态特征
• 3.1.6 筛选菌株HB003的生理试验
• 3.1.7 筛选菌株HB003在几丁质液体培养基中的生长曲线
• 3.1.8 筛选菌株HB003的分子生物学鉴定
• 3.2 筛选菌株HB003发酵产氨基寡糖素的条件选择
• 3.2.1 培养温度对氨基寡糖素产量的影响
• 3.2.2 接种量对氨基寡糖素产量的影响
• 3.2.3 通气量对氨基寡糖素产量的影响
• 3.2.4 发酵培养基起始pH对氨基寡糖素产量的影响
• 3.2.5 底物浓度（甲壳素）含量对氨基寡糖素产量的影响
• 3.2.6 添加补充氮源对氨基寡糖素产量的影响
• 3.2.7 筛选菌株HB003产氨基寡糖素多因素最佳条件的选择
• 3.2.8 筛选株HB003在所选最佳条件下产氨基寡糖素的发酵生理
• 第四章 结论与讨论
• 4.1 生产氨基寡糖素菌株的分离和筛选
• 4.2 生产氨基寡糖素菌株的生物学特性研究
• 4.3 筛选菌株发酵生产氨基寡糖素的发酵条件优化
• 4.4 本研究的独特性和新颖性
• 4.5 本研究的进一步设想
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文