DNA损伤修复蛋白在肺癌发生中的作用

论文摘要

肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤,是癌症引起患者特别是男性患者死亡的主要原因。世界卫生组织（WHO）公布的资料显示,肺癌无论从发病数量还是死亡数量来看,均为全球最主要的癌症。同期预测,我国将成为21世纪的肺癌大国。肺癌几乎包括来源于气管、支气管或肺上皮的肿瘤,其基本病理类型包括鳞状细胞癌、腺癌,大细胞癌（统称非小细胞肺癌,NSCLC）及小细胞肺癌。除了吸烟,肺癌阳性家族史被认为是一个危险因素。基因改变包括p53基因的频繁突变,激活癌基因KRAS的点突变,FHIT基因杂合子频繁丢失和异常转录,CDK抑制子P16纯合子缺失和转录沉默。肺癌风险的增加与特定的细胞色素P450基因的多态性和DNA修复能力缺陷包括DNA碱基切除修复基因XRCC1,PARP-1和ERCC4相关。DNA是生命体中最重要的遗传物质,DNA损伤引起的细胞应激反应对于保证遗传物质的稳定性、抑制基因突变的产生及维持细胞寿命具有重要意义。如同其它恶性肿瘤的发生一样,NSCLC的发生也是一个多因素、多阶段、多步骤的复杂的过程。其主要机制是各种因素导致的原癌基因激活或抑癌基因失活,DNA损伤修复基因功能低下或缺失,以及一些信号通路共同参与的结果。DNA损伤修复基因在维护遗传基因的完整性和稳定性,防止细胞癌变方面具有非常重要的作用。本实验主要探讨参与DNA损伤修复蛋白Mre11、Ku80的表达与肺癌患者相关性,并构建DNA损伤修复蛋白PARP-1缺失的小鼠肺癌细胞系,为进一步临床抗肿瘤药物研究提供细胞评价平台。实验方法：（1）采用免疫组织化学的方法检测DNA损伤修复蛋白在人肺癌组织中的表达情况,进行统计学分析,运用非参数检验的方法,进而评价肺癌组织中Mre-11、Ki67蛋白的表达与患者性别、年龄、临床分期及病理分型的相关性。（2）应用PARP-1敲除小鼠肺肿瘤模型进行原代培养,通过形态学观察、免疫荧光及致瘤性分析,以此鉴定构建PARP-1缺失的小鼠肺腺癌细胞系。实验结果：（1）通过免疫组化学及统计学分析表明,虽然Mre-11蛋白表达量与患者年龄、性别、病理分型、肿瘤大小（TNM分期）无明显关系（P>0.05）,但其在Ⅰ期肺腺癌组织中表达较低,随着肿瘤的进展表达上升,在Ⅱ期标本中表达达到峰值,在Ⅲ期标本中表达又回落至较低水平,统计学上具有显著差异（P<0.05）,提示DNA损伤修复蛋白Mre11与肺癌的发生具有相关性。（2）建立了有效的小鼠原代肺癌细胞培养方法。（3）成功的获得了两例原代小鼠肺腺癌细胞株,光镜和电镜下具有典型的上皮特征。裸鼠移植瘤接种检测表明这些上皮来源的细胞具有致瘤性。结论：（1）通过免疫组织化学结果分析表明DNA损伤修复蛋白Mre-11的表达与人肺腺癌组织临床分期有显著关联性（P<0.05）,根据在各期表达的规律,提示Mre-11在肺腺癌进展过程中可能起到抑制作用；而Ki67蛋白的表达则与肺腺癌患者性别、年龄、临床分期、TNM分期及病理分化程度均无明显关系（P>0.05）。（2）成功建立了PARP-1缺失的小鼠肺腺癌原代培养细胞株,并证明导致肿瘤的发生；此细胞系的确立,为临床抗肿瘤药物提供了一个研究平台。

论文目录

• 前言
• 中文摘要
• Abstract
• 第1章 DNA损伤修复与肿瘤发生及肺癌相关性
• 1 DNA损伤修复途径
• 2 DNA损伤修复基因多态性与肺癌的关系
• 3 肺癌标志物
• 参考文献
• 第2章 Mre-11和Ki67蛋白在人肺腺癌组织中的表达及临床意义
• 前言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验步骤
• 结果
• 1 Mre-11和Ki67蛋白在人肺癌组织中的表达情况
• 2 相关蛋白的免疫组化结果与人肺癌组织各项临床指标分析
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第3章 PARP-1缺失小鼠肺癌细胞系的建立
• 前言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 结果
• 1 原代细胞培养
• 2 扫描电镜和透射电镜观察细胞形态
• 3 细胞荧光免疫分析
• 4 细胞周期检测结果
• 5 裸鼠移植瘤接种及免疫组化结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历及在学期间论文发表情况
• 致意
• 致谢