血清淀粉样蛋白A对人脐静脉内皮细胞的影响研究初探

论文摘要

冠状动脉疾病（Coronary Artery Disease, CAD）;是最常见的心血管疾病,越来越受到全球人民的关注。冠心病的主要机制是动脉粥样硬化（Atherosclerosis, AS）。为了更好地治疗和预防AS,对AS形成过程的研究是十分有必要的。过去的研究证明,在AS形成过程中,一直有炎症分子的参与。因此,AS现在被认为是一种慢性炎症疾病。在炎症刺激下C-反应蛋白（C-reactive protein, CRP）和血清淀粉样蛋白A（serum amyloid a, SAA）都能大量表达,而目前CRP已经被认为是一种能直接导致冠心病的危险因子。然而对SAA的研究却相对较少,尤其在AS形成的直接作用方面。我们认为SAA可能对AS的形成有直接的作用。本文旨在探讨SAA在诱导人脐静脉内皮细胞炎症过程中的直接作用,并对其作用机制进行一定的研究；探讨SAA在人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶的表达以及一氧化氮合成中的作用；并对SAA和肥胖的相关性进行一定的研究。为临床治疗冠心病提供一定的依据。本研究主要从三个方面展开工作。第一部分血清淀粉样蛋白A对人脐静脉内皮细胞粘附分子表达的影响研究本章节主要研究血清淀粉样蛋白A对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）粘附分子表达的影响,并对其作用机理进行一定的探讨。用不同浓度的SAA作用体外培养的HUVEC,通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）的方法检测细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1）、血管粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1）和E-选择素（E-selectin）的mRNA的表达。用酶联免疫吸附（ELISA）的方法检测细胞表面蛋白和分泌蛋白的表达。凝胶迁移实验（EMSA）的方法检测核蛋白和DNA的相互作用。实验数据显示用20μg／mL的人重组SAA刺激显著诱导了HUVEC的ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的mRNA的转录,作用2小时后粘附分子表达显著增多,并且在4-6小时达到高峰,8小时后开始下降。ELISA的结果显示SAA作用4小时后,细胞表面粘附分子表达显著增多（P<0.05）,作用24小时后细胞分泌的粘附分子显著增多（P<0.05）。用核因子NFκB抑制剂BAY-11-7082可以阻断SAA的这种作用。EMSA的结果显示SAA可以直接活化NFκB。因此,通过本节的实验证明SAA能显著诱导HUVEC粘附分子的表达,并且是通过NFκB途径调控的。第二部分血清淀粉样蛋白A对内皮功能影响的研究本章节主要研究SAA对HUVEC的内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的作用,并对其作用机理进行一定的探讨。在培养的人血管内皮细胞中,用重组的人的SAA刺激,收获不同干预时间的细胞和培养液，通过RT-PCR的方法检测eNOS的]mRNA转录水平；通过免疫印迹的方法来检测eNOS蛋白的表达量；通过比色分析的方法来测定一氧化氮的产量；通过MTT法来测定内皮细胞的增殖。实验结果显示SAA（≥10μg／mL）能显著地抑制eNOS基因的转录和蛋白的表达P<0.05)；减少一氧化氮的产量和内皮细胞的增殖（P<0.05）。实验证明SAA通过抑制eNOS的活性,减少一氧化氮的产量和内皮细胞的增殖,使内皮细胞功能受损。第三部分血清淀粉样蛋白A和肥胖症本章节主要是对已发表的一些研究进行统计分析,探讨SAA和肥胖间的关系。在PubMed上以‘’serum amyloid A"和"obesity"为关键词搜索。检索到81篇从1966年1月到2009年7月的文章。其中只有11篇横断面调查研究和10篇成功的进行了介导减肥的文章符合本次Meta分析的要求。对筛选出的文章提取数据进行Meta分析。通过对11个横断面调查研究的分析发现SAA和体质指数（Body Mass Index, BMI）之间具有正相关性,相关系数：0.230（95%置信区间0.160-0.297,P<0.0005）。8篇前瞻性研究中,体重减轻前后SAA水平有显著性差异,标准化的均值差-0.480（95%置信区间-0.678—-0.283,P<0.0005）。并且对可能的机制和降低肥胖病人SAA水平的临床应用进行了讨论。本次的Meta分析和综述揭示了SAA和BMI是正相关的,体重减轻和SAA水平降低是相关的。

论文目录

• 论文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 血清淀粉样蛋白A通过NFκB途径诱导人脐静脉内皮细胞粘附分子表达研究
• 摘要
• 引言
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 血清淀粉样蛋白A对内皮功能影响的研究
• 摘要
• 引言
• 材料和方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 血清淀粉样蛋白A和肥胖症
• 摘要
• 引言
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第四部分 血清淀粉样蛋白A和冠心病（研究综述）
• 参考文献
• 附录
• 后记