论文摘要
目的:以金雀异黄素为先导化合物,通过定向化学结构改造,获得一系列金雀异黄素的衍生物,通过建立PC12细胞氧化应激损伤模型,从中筛选出一种较先导化合物更有效的对神经细胞氧化应激损伤具有拮抗作用的活性新化学实体,即7一二氟甲基金雀异黄素。研究该活性新化学实体对PC12细胞氧化应激损伤的拮抗作用,并初步探讨其作用机制,为深入研究金雀异黄素衍生物的抗氧化作用在神经系统疾病治疗中的开发应用提供实验依据。方法:体外培养PC12细胞,用不同浓度的H202孵育细胞24小时,通过检测培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）的活性、细胞活性和细胞凋亡率,建立氧化诱导PC12细胞损伤和凋亡模型。用氧化诱导PC12细胞损伤和凋亡模型,筛选出一种活性新化学实体进行进一步实验研究。实验分组如下（1）空白对照组（2） H202损伤组（3）先导化合物组（4）7一二氟甲基金雀异黄素组。应用多功能生化分析仪测定培养液上清中的乳酸脱氢酶（LDH）的活性,MTT法检测细胞活性;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡程度和细胞周期改变;Western Blot检测PC12细胞磷酸化ERK1/2和磷酸化P38蛋白的表达。结果: H202 （40μmmo1/L ）孵育PC12细胞24h, LDH释放增多,细胞凋亡率升高,细胞增殖活性下降。不同浓度的金雀异黄素衍生物预处理细胞后发现:在先导化合物（5,7, 4’-三羟基黄酮）基本结构基础上,C-7位引入二氟甲基获得的7-二氟甲基金雀异黄素的抗PC12细胞氧化应激损伤活性最高。H202 （40μmmo1/L ）孵育PC12细胞24h, LDH释放增多; PC12细胞生长和增殖受到明显抑制;细胞凋亡增多;PC12细胞磷酸化ERK1/2和P38的表达上调。用7-二氟甲基金雀异黄素预先保护后可见:（1）细胞生长和增殖活性呈浓度依赖性升高,LDH释放减少;细胞凋亡率呈浓度依赖性降低。（2） PC12细胞磷酸化ERK1/2表达进一步上调,而磷酸化P38的表达下调。结论:1. 7-二氟甲基金雀异黄素对PC12细胞氧化应激损伤具有拮抗作用。2. 7-二氟甲基金雀异黄素对PC12细胞氧化应激损伤的拮抗作用与上调磷酸化ERK1/2的表达,抑制P38的活性有关。
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标签：金雀异黄素论文; 二氟甲基金雀异黄素论文; 细胞论文; 氧化应激论文; 拮抗作用论文;