补益阳明津气方药对初老雌性大鼠卵巢机能影响的实验研究

论文摘要

目的:经实验研究探讨“补益阳明津气”方药益胃汤对初老雌性大鼠卵巢机能影响的作用机理,与前期研究相结合以共同佐证中医传统经典理论“五七,阳明脉衰”在绝经前期生殖轴机能衰老中的意义和作用。为延缓绝经前期卵巢机能衰老,促进绝经前期妇女健康,防治相关病症,提供一种新的研究与论治思路。方法:4月龄～6月龄SD雌性大鼠为正常对照组;10月龄～12月龄,阴道细胞学表现动情期延长的SD雌性大鼠作为初老模型大鼠。模型动物随机分为:（1）益胃汤高剂量组、（2）益胃汤中剂量组、（3）益胃汤低剂量组、（4）六味地黄丸组、（5）己烯雌酚组、（6）模型对照组。各给药组灌胃4周后,断头处死,取子宫和卵巢称重,用于子宫和卵巢系数的检测,其中左侧卵巢组织采用免疫组化法检测ER、FSHR表达;右侧卵巢组织用于检测细胞凋亡指标Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、Fas mRNA、FasL mRNA、Caspase3 mRNA的表达;部分卵巢组织用电镜观察其组织学变化和超微结构。结果:与模型对照组比较,生殖内分泌机能调控方面:“补益阳明津气”方药益胃汤能增加大鼠子宫指数、卵巢指数,使卵巢ER、FSHR表达上调。细胞凋亡的研究方面:益胃汤可使卵巢Bcl-2 mRNA表达增强,Bax mRNA表达减弱,Fas mRNA、FasL mRNA、Caspase3 mRNA表达下调,抑制卵巢细胞凋亡,但未能恢复至正常对照组水平;电镜观察益胃汤可丰富卵巢颗粒细胞内线粒体和滑面内质网,胞质内有大量脂滴,凋亡小体少见。与模型对照组比较,己烯雌酚组和六味地黄丸组能促进卵泡生长,正向调节卵巢的ER和FSHR表达。与益胃汤相比较本实验研究结果显示:己烯雌酚组对ER、FSHR上调作用不及益胃汤高剂量组;六味地黄丸上调ER、FSHR的作用与益胃汤中剂量无明显差异,但高于益胃汤低剂量组。与模型对照组比较,己烯雌酚组和六味地黄丸在一定程度上抑制卵巢细胞的凋亡。与益胃汤相比较,己烯雌酚组Bcl-2 mRNA表达低于益胃汤高剂量组,FasmRNA、FasL mRNA、Caspase3 mRNA高于益胃汤高剂量组,Bax mRNA表达两组无显著差异。六味地黄丸组Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达与益胃汤中、低剂量组无明显差异,Fas mRNA、FasL mRNA表达高于益胃汤中剂量组,与低剂量组无明显差异,Caspase3 mRNA水平低于益胃汤低剂量组,与中剂量组无明显差异。结论:实验研究提示益胃汤具有类雌激素样作用,促进卵泡生长,改善初老雌性大鼠卵巢的激素内环境,并能抑制卵巢细胞凋亡等作用。这些作用可能是其延缓卵巢机能衰老的机理。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 缩略词表
• 引言
• 实验研究
• 1.实验研究材料
• 1.1 研究对象
• 1.2 受试药物
• 1.3 主要试剂和药品
• 1.4 主要仪器和设备
• 2.实验方法
• 2.1 模型的建立
• 2.1.1 初老大鼠模型
• 2.1.2 正常对照大鼠
• 2.2 分组及给药方法
• 2.3 检测项目
• 2.3.1 子宫重量系数、卵巢重量系数
• 2.3.2 免疫组化
• 2.3.2.1 组织标本的采集与处理方法
• 2.3.2.2 SP检测方法
• 2.3.2.3 图像分析方法
• 2.3.3 原位杂交
• 2.3.3.1 标本的采集与制备
• 2.3.3.2 原位杂交检测方法
• 2.3.3.2.1 试剂的配置
• 2.3.3.2.2 检测方法
• 2.3.3.3 图像分析方法
• 2.3.4 益胃汤对卵巢颗粒细胞超微结构的调控作用
• 2.4 实验资料的统计与处理
• 3.实验结果
• 3.1 益胃汤对子宫重量系数、卵巢重量系数的影响
• 3.2 益胃汤对卵巢ER、FSHR的影响
• 3.3 益胃汤对初老大鼠卵巢细胞凋亡的影响
• 3.4 益胃汤对初老雌性大鼠颗粒细胞超微结构的影响
• 4.讨论
• 4.1 模型动物的选择
• 4.1.1 实验动物的选择
• 4.1.2 围绝经期模型动物的选择
• 4.1.3 本研究实验动物模型的判定
• 4.2 对照药物的选择
• 4.2.1 己烯雌酚的选择
• 4.2.2 六味地黄丸的选择
• 4.3 补益阳明津气的立法依据和处方原则
• 4.3.1 祖国医学对"阳明"的认识
• 4.3.1.1 胃为水谷之海,气血生化之源
• 4.3.1.2 阳明脉与冲任
• 4.3.2 "阳明脉衰"与衰老的相关性
• 4.3.3 未病先防,补益阳明,后天养先天
• 4.3.4 治疗上以益胃生津为法
• 4.4 益胃汤对卵巢内分泌机能的影响
• 4.4.1 益胃汤对子宫、卵巢重量系数的影响
• 4.4.2 益胃汤对卵巢激素受体的影响
• 4.5 益胃汤对卵巢细胞凋亡的影响
• 4.5.1 分子原位杂交检测凋亡基因对卵巢细胞凋亡的影响
• 4.5.1.1 益胃汤对线粒体通路的影响
• 4.5.1.2 益胃汤对死亡受体通路的影响
• 4.5.1.3 降低凋亡信号,抑制卵巢细胞凋亡
• 4.5.2 电镜观察益胃汤对卵巢颗粒细胞凋亡的影响
• 结语
• 1.本课题研究思路和创新点
• 1.1 课题研究思路
• 1.2 实验研究思路
• 1.3 实验研究结论
• 2.存在的问题和展望
• 2.1 存在的问题
• 2.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 综述:
• 在校期间公开发表的学术论文、专著及科研成果