艾灸促进应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜修复作用及其ERK信号转导途径的研究

论文摘要

目的：通过观察艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜损伤的修复效应、大鼠血清和胃黏膜EGF、TGF-α勺含量,增殖修复相关物质（TFF1、MT、HSP70、PCNA）以及ERK信号转导途径中关键因子（EGFR、p-ERK1/2、AP-1）的表达,探讨艾灸防病保健理论的分子生物学基础,证实艾灸预处理促进应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞增殖的修复作用。方法：SD大鼠随机分为4组,即空白组、模型组、艾灸穴位组、艾灸非穴组。采用水浸束缚应激法（WRS）制备应激性大鼠胃黏膜损伤模型,以艾灸预处理足三里、中脘、脾俞、胃俞等穴位为被试因素,按Guth标准记录大鼠胃黏膜损伤指数,光镜下观察胃黏膜组织形态学变化；采用放免法检测血清中EGF、TGF-α的含量；酶免法检测胃黏膜组织中EGF、TGF-α、TFF1、MT、HSP70、PCNA等物质的含量；Western blot和免疫组化法检测EGFR、p-ERK1/2、AP-1蛋白表达。结果：（1）造模后,模型组大鼠胃黏膜损伤指数最高,正常组大鼠胃黏膜损伤指数最低,两组间差异有非常显著性意义（P<0.01）,说明WRS造模成功；艾灸穴位组大鼠胃黏膜损伤指数明显降低,与模型组、艾灸非穴组比较有非常显著性差异（P<0.01）（2）艾灸足三里、中脘等穴可提高应激性胃黏膜损伤大鼠血清和胃黏膜中EGF、TGF-α的含量,明显高于模型组与艾灸非穴组（p<0.05或p<0.01）。（3）艾灸足三里、中脘等穴可升高应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜中TFF1、MT、HSP70、PCNA的含量,’明显高于模型组与艾灸非穴组（p<0.05或p<0.01）。（4）艾灸足三里、中脘穴可以上调应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞EGFR、p-ERK1/2、AP-1的表达,与模型组和艾灸非穴组比较具有非常显著性差异（p<0.01）。结论：（1）艾灸预处理可明显改善应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜组织形态学,降低胃黏膜损伤指数,具有相对穴位特异性。（2）艾灸预处理可上调应激性胃黏膜损伤大鼠血清、胃黏膜EGF、TGF-α的含量,促进细胞增殖,组织修复。（3）艾灸预处理通过上调应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜HSP70、MT表达,激发了机体内源性保护机制,提高机体免疫力,为艾灸预保护作用的发挥奠定了一定的物质基础。（4）艾灸预处理可上调应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞增殖相关物质TFF1、PCNA的表达,促进胃黏膜细胞增殖修复。（5）艾灸预处理通过对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜ERK信号转导途径中关键因子EGFR、p-ERK1/2、AP-1的上调,实现促进胃黏膜细胞增殖的修复作用。（6）艾灸对胃黏膜保护作用具有一定的穴位特异性,反映了艾灸-穴位-经络的“综合效用”结果。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文名词术语对照表
• 引言
• 第一部分 艾灸预处理对大鼠胃黏膜损伤修复的组织形态学影响
• 材料与方法
• 1. 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 施灸材料
• 1.3 主要仪器及试剂
• 1.4 主要器械
• 2. 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 应激性胃黏膜损伤大鼠模型制备方法
• 2.3 穴位、非穴对照点定位
• 2.4 艾灸方法
• 2.5 实验步骤
• 2.6 胃黏膜损伤指数（UI）计分
• 2.7 光镜标本制作程序
• 2.8 统计学方法
• 结果与分析
• 1. 各组大鼠胃黏膜损伤修复的肉眼观察结果
• 2. 各组大鼠胃黏膜损伤指数（UI）的比较
• 3. 各组大鼠胃黏膜损伤修复的光镜观察结果
• 4. 讨论
• 第二部分 艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞增殖及相关因子表达的影响
• 材料与方法
• 1. 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 施灸材料
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要器械
• 1.5 主要仪器设备
• 2. 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 应激性胃黏膜损伤大鼠模型制备方法
• 2.3 穴位定位
• 2.4 艾灸方法
• 2.5 实验步骤
• 2.6 血清EGF、TGF-α含量的测定
• 2.7 胃黏膜EGF、TGF-α、TFF1、HSP70、MT、PCNA含量的测定
• 2.8 统计学方法
• 结果与分析
• 1. 艾灸预处理对胃黏膜损伤大鼠血清和胃黏膜组织生长因子的影响
• 2. 艾灸预处理对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜增殖修复相关物质的影响
• 3. 讨论
• 第三部分 艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞ERK信号转导途径的影响
• 材料与方法
• 1. 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 施灸材料
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要器械
• 1.5 主要仪器设备
• 2. 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 应激性胃黏膜损伤大鼠模型制备方法
• 2.3 穴位定位
• 2.4 艾灸方法
• 2.5 实验步骤
• 2.6 胃黏膜EGFR、p-ERK1/2、AP-1的免疫组化检测方法
• 2.7 胃黏膜EGFR、p-ERK1/2、AP-1的western-blot检测方法
• 2.8 统计学方法
• 结果与分析
• 1. 艾灸预处理对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞EGFR、p-ERK1/2、AP-1表达的影响（免疫组化）
• 2. 艾灸预处理对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞EGFR表达的影响（western-blot）
• 3. 艾灸预处理对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞p-ERK1/2表达的影响（western-blot）
• 4. 艾灸预处理对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞AP-1表达的影响（western-blot）
• 5. 讨论
• 第四部分 全文讨论
• 1. 祖国医学对灸法"治未病"的认识
• 2. "逆灸"与艾灸预处理
• 3. 祖国医学对消化性溃疡的认识
• 4. 现代医学对胃黏膜损伤保护的认识
• 5. 艾灸对胃黏膜损伤的修复效应及其作用机理
• 5.1 临床研究
• 5.2 实验研究
• 5.3 艾灸的温热效应产生温补作用
• 5.4 本研究的选穴依据
• 6. 艾灸促进胃黏膜损伤修复的作用机制
• 6.1 上调血清、胃黏膜生长因子的表达是"灸治未病"的始动环节
• 6.2 诱导内源性保护蛋白的表达是艾灸温热效应促进胃黏膜损伤修复的物质基础
• 6.3 激活ERK是艾灸调节胃黏膜损伤修复信号转导的中心环节
• 7. 本研究存在的问题与展望
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附图
• 附录
• 文献综述
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表论文、参与科研、交流学习及获奖情况