组织工程学椎间盘种子细胞三维培养的实验研究

论文摘要

目的: 本实验拟建立人退变椎间盘立体培养的细胞模型,从形态学、组织学、细胞生物学等方面对比其与单层培养模型的差别,并对立体培养的椎间盘细胞的胶原进行检测,试图解决成人退变椎间盘的组织工程学的实施中种子细胞难于收集且难于成活的难题。 方法: 1、利用酶消化法对胎儿椎间盘和手术取出的病人退变椎间盘组织进行原代细胞培养,分为单层培养和立体培养两种培养方式,并根据病人的年龄进行分组。 2、对不同组的单层、立体培养的椎间盘细胞进行形态学、组织学观察,在细胞生长过程中应用倒置相差显微镜进行观察;收集细胞进行超薄切片,利用透射电镜观察其亚超微结构;对细胞标本行Giemsa和HE染色,光镜观察,对比其形态学的不同。 3、对不同组的单层、立体培养的椎间盘细胞进行细胞生物学的检测,包括细胞生长曲线、细胞接种存活率、增殖细胞核抗原检测、细胞生长活性、细胞周期、细胞凋亡等方面的检测,分别阐明单层培养和立体培养对于细胞生长的影响,并进行对比。 4、对不同组的细胞进行细胞外基质定量检测,利用western blot免疫印记方法定量检测椎间盘细胞主胶原和微量胶原的含量;利用35S标记放射免疫法定量检测细胞蛋白多糖的含量;比较不同培养方式对细胞外基质合成的影响。 结果: 1、使用组织块消化法成功的建立了体外成人退变椎间盘细胞模型,并在此基础上利用微载体旋转培养系统成功构建了成人退变椎间盘细胞的立体培养模型。 2、胎儿和成人退变椎间盘细胞分别进行单层培养,其生长曲线,接种存活率、细胞增殖、细胞生长活性等指标检测结果示,胎儿椎间盘细胞各项指标均较成人退变椎间盘细胞的表达为好,细胞生长快、增殖快、活性高。提示成人椎间盘细胞的细胞功能发生退变。

论文目录

• 引言
• 材料与方法
• 第一章 椎间盘细胞立体培养模型的建立
• 第二章 椎间盘细胞的形态学、组织学、细胞生物学研究
• 第三章 椎间盘细胞的细胞外基质表达
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献
• 学位论文独创性声明
• 学位论文知识产权权属声明