论文摘要
青花菜（Brassica.oleracea L.var.itaica planch.）为十字花科芸薹属蔬菜,在世界范围内广泛种植,目前已成为我国重要的内销与出口蔬菜。本文对国内广泛种植的18个青花菜品种进行鉴定,并分析青花菜与其近缘种之间的遗传多样性;同时对青花莱中两个细胞质雄性不育系从细胞学与分子水平进行胞质鉴定。利用随机扩增多态性DNA（RAPD）和简单重复序列间扩增（ISSR）标记对18个青花菜品种进行鉴定。74个RAPD引物检测到614个位点,其中多态性位点344个;8个ISSR引物检测到84个位点,其中多态性位点67个。利用最少2个引物组合即可将这些青花菜品种区分开,表明RAPD与ISSR标记适用于青花菜品种鉴定。所有青花菜可分为2亚组,亚组A包括13个品种,其中除9号‘Jinl（u∣¨）wang’和13号‘US AgriseedsOASI 808F1’外均来自于日本种子公司;亚组B由5个品种组成,品种成熟期皆偏早。对18个青花菜品种与6个芸薹属品种（3个花椰菜,1个甘蓝,1个小白菜,1个大白菜）和1个萝卜品种进行遗传多样性分析。聚类图（uPGMA）中将所有材料明显分成2亚组:萝卜亚组与芸薹属亚组;芸薹属蔬菜亚组可进一步细化为2个次亚组:Ⅰ白菜类,Ⅱ甘蓝类。主成分分析（PCoA）将所有材料聚为3类:Ⅰ萝卜,Ⅱ不结球白菜与大白菜,Ⅲ甘蓝类蔬菜。聚类分析与主成分分析显示在供试的芸薹属蔬菜中,青花菜与花椰菜遗传关系最近,其次是与甘蓝亲缘关系较近,最后是与不结球白菜和大白菜;萝卜独立于24份材料之外。为鉴定青花菜雄性不育系NAU-LB和NAU-YX的不育胞质类型,利用可育系NAU-Q3进行杂交并回交观察育性,F1与回交后代皆表现为100%雄性不育,因此初步确定NAU-LB和NAU-YX属于细胞质雄性不育。以可育NAU-Q3为对照对不育系小孢子发育过程进行切片观察,光学显微观察发现回交后代NAU-03LB小孢子败育发生于单核期,主要是由于绒毡层过度液泡化挤压小孢子并提前解体造成,此败育方式相似于萝卜Ogura CMS的败育方式;回交后代NAU-04YX的花药受阻于孢原细胞时期,无花粉囊的分化,花药由薄壁细胞和维管束组成,部分药室能够形成花粉囊,最终发育成成熟花粉,此败育特征与Polima CMS相似。超微显微切片发现NAU-04YX的败育结果与光学切片一致,但部分具有花粉囊分化的药室花粉败育较早,在花粉母细胞时期即存在不正常现象。利用三对特异引物扩增Ogura细胞质雄性不育相关基因orf138,在雄性不育系NAU-03LB和NAU-04YX中兼扩增出特异条带,并且每对引物在两不育系中产生的条带分子量一致,而在可育系NAU-Q3缺失特异条带。对特异条带回收克隆并测序发现与orf138高度同源。本试验结果有力证明,两个青花菜雄性不育属于Ogura CMS。