论文摘要
目的:糖尿病肾病（Diabetes nephropathy, DN）是糖尿病严重的慢性并发症之一,也是糖尿病患者重要的死亡原因。正常条件下,肾小球细胞外基质（ECM）的合成与降解保持着动态平衡。任何环节的细微变化均可导致肾小球ECM成与降解失衡,出现肾小球基质膜（GBM）的破坏和ECM堆积,长期得不到纠正,即可导致肾小球硬化。DN发病机制复杂,影响因素众多,目前认为凝血是DN发病过程中重要原因之一。众多生长因子、细胞因子启动外源性凝血途径,凝血酶原复合物（ Factor Va/Factor Xa/Ca2+和磷脂）激活凝血酶原形成凝血酶,凝血酶催化可溶性纤维蛋白原形成不溶性的纤维蛋白,纤维蛋白单体在肾小球系膜区形成交联纤维（XFB）,最后导致细胞外基质（ECM）的积聚。本研究检测Factor V在DN病人血清水平和DN大鼠肾脏组织蛋白水平表达情况及TIMP-1、MMP-9、Ⅳ型胶原、在DN大鼠肾脏组织蛋白水平的表达情况,旨在探讨凝血在DN发病过程中的作用,为DN的诊断治疗寻找新的途径。方法:收集糖尿病肾病病人共60例,按照1999年世界卫生组织（WHO）诊断标准确诊。按Mogensen建议,根据糖尿病患者肾功能和结构病变的演进及临床表现分为Ⅱ-V期;正常对照组:健康正常人10名。取静脉血3ml,采用促凝分离胶,3000r/min离心15 min,取血清-20℃冻存,应用ELISA的方法检测FV血清水平,450nm酶标仪进行吸光度检测。健康雄性Wistar大鼠38只,一次大量腹腔注射streptozotoci（nSTZ）。72小时后测随机血糖>16.6mmol/L,尿糖++-+++,尿量增加150%,为糖尿病肾病大鼠模型的标准进行筛选。分别饲养2、4、6、8周,监测血糖,血糖下降者予以剔除。大鼠腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为对照组。采用免疫组织化学的方法检测FV、TIMP-1、MMP-9和Ⅳ型胶原蛋白水平的表达。结果:FV在DN病人血清水平是明显升高的,与正常对照组比较P<0.01。FV在2、4、6、8周DN大鼠肾脏组织蛋白水平的表达与对照组比较也有明显升高P<0.05;TIMP-1在对照组与2、4、6、8周DN大鼠肾脏组织中的表达分别为:4.088%±1.041,7.950%±1.418,10.483%±1.107,14.867%±1.034,18.461%±1.98,与正常组比较P<0.01;MMP-9在正常对照组与2、4、6、8周DN大鼠肾脏组织中的表达分别为:9.559%±1.99,23.45%±3.68,16.62%±1.23,13.36%±3.36,7.65%±2.5,正常组与8周比较:P>0.05,2周与对照组比较:P<0.01,6周和8周比较:P≤0.05,6周和4周比较:P>0.05,与TIMP-1作为MMP-9抑制物的结论相一致;Ⅳ型胶原在对照组与2、4、6、8周DN大鼠肾脏组织中的表达分别为:7.917%±0.8,12.474%±0.58,13.5%±0.73,14.77%±1.12,16.12%±1.01,P<0.05,表明在DN发病过程中,有明显的ECM积聚,具有显著统计学意义。结论: DN病人血清FV与正常对照比较有明显升高,并随着病情不断发展而逐渐升高;FV在DN大鼠肾脏组织蛋白水平的阳性表达也是明显升高的;TIMP-1和Ⅳ型胶原在DN大鼠肾脏组织与对照比较有明显表达,而MMP-9随着病情的发展其阳性表达是下降的。