恒古骨伤愈合剂对LPS、TNF-α和PAF诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

论文摘要

【目的】观察云南彝药恒古骨伤愈合剂对人脐静脉内皮细胞损伤（HUVEC）的保护作用，探讨其对下肢深静脉血栓形成防治的可能机制。【方法】用LPS、TNF-α和PAF诱导HUVEC损伤，采用MTT法观察恒古骨伤愈合剂对HUVEC活性的影响；Fura-2／AM荧光探针负载细胞，用双波长荧光分光光度法测定HUVEC细胞内游离钙离子浓度；用ELISA法测定培养的细胞上清液中t-PA、PAI—1含量的变化。【结果】LPS 300 mg╱刺激内皮细胞48 h、TNF-α20μg╱L刺激内皮细胞24 h、PAF70μmol／L刺激内皮细胞2 h后，可明显降低HUVEC的吸光度A值，细胞内钙离子浓度升高，PAI—1浓度明显升高，与对照组相比，差异有显著性意义（P＜0.01），而t-PA浓度无明显变化（P＞0.05）；各浓度的恒古骨伤愈合剂可升高LPS、TNF-α和PAF引起的HUVEC的A值降低，并呈浓度依赖性地显著降低HUVEC内游离钙浓度的升高（P＜0.01）；恒古骨伤愈合剂200 mg╱L、100 mg╱L、50 mg╱L组明显抑制LPS、TNF-α、PAF诱导的PAI-1分泌增多（P＜0.01），对t-PA无明显影响。【结论】恒古骨伤愈合剂对LPS、TNF-α和PAF诱导的HUVEC损伤具有保护作用，可能与其降低细胞内钙离子浓度有关；恒古骨伤愈合剂抑制PAI—1产生，维持纤溶系统平衡，可能是防治下肢深静脉血栓形成的重要机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 1 材料
• 1.1 细胞株
• 1.2 供试品
• 1.3 阳性对照品
• 1.4 主要试剂
• 1.5 主要仪器及设备
• 2 方法
• 2.1 药物和主要试剂的配制
• 2.2 人脐静脉内皮细胞培养
• 2.3 MTT法测定细胞存活率
• 2.4 损伤模型的制备
• 2.5 MTT法测定恒古骨伤愈合剂对HUVEC活性的影响
• 2.6 MTT法检测恒古骨伤愈合剂对HUVEC的毒性
• 2.7 Fura-2/AM负载细胞
• 2.8 双波长荧光光度法测定细胞内游离钙浓度
• 2.9 t-PA、PAI-含量测定
• 2.10 统计方法
• 3 结果
• 3.1 LPS、PAF和TNF-α对HUVEC存活率的影响
• 3.2 恒古骨伤愈合剂对HUVEC的毒性实验
• 3.3 恒古骨伤愈合剂对HUVEC活性的影响
• 3.4 恒古骨伤愈合剂对HUVEC内钙离子浓度的影响
• 3.5 恒古骨伤愈合剂对HUVEC t-PA、PAI-1含量的影响
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 攻读学位期间的主要成果
• 致谢