论文摘要
牙槽骨是体内容易发生骨质疏松的骨组织，主要表现为牙槽骨高度下降、骨密度降低，从而导致牙齿松动与脱落，直接影响患者牙齿与牙周组织的健康及口腔治疗。牙周组织中功能最重要的是牙周膜成纤维细胞，不仅维持牙周膜的形态和功能，更具有成骨潜力。研究证明，牙周膜成纤维细胞在牙周组织的成骨分化中担当重要角色。作为雌激素靶器官的牙周组织，与雌激素和雌激素受体的关系非常密切。雌激素水平的降低，使破骨细胞数目显著增加，牙槽骨吸收加剧，引起牙槽骨骨密度的降低。雌激素水平升高后，破骨细胞数目得到抑制，骨密度增高。雌激素受体也与牙周组织关系密切。实验证明，在牙周病大鼠模型中，雌激素受体表达量是显著下降的。如果抑制了雌激素受体的表达，牙周膜细胞的骨向分化能力显著降低。脯氨酸-胱氨酸-亮氨酸蛋白1（praline-,glutamic acid-,and leucine-rich protein1，PELP1）是雌激素和雌激素受体的重要调节因子，在雌激素很多靶器官中表达，如脑、乳腺、子宫等。PELP1的表达具有差异性，可以表达在胞核，也可以表达在胞浆，其表达与细胞的生物学功能相一致。胞核中表达的PELP1主要参与基因信号通路，而胞浆中的PELP1主要与非基因通路相关。非基因通路又称做快速信号通路，与细胞的生长、增殖、凋亡、分化相关联。研究证明，在雌激素靶器官中，PELP1是雌激素发挥作用的重要介导者，在雌激素生物学作用的发挥中占据重要地位，不可缺少。PELP1是否在牙周组织及牙周膜细胞中表达尚未见报道。我们推测，作为雌激素重要靶器官的牙周组织，应该与雌激素受体的调节因子PELP1有着重要联系。因而，本课题围绕PELP1在牙周膜组织及牙周膜成纤维细胞中的表达及与骨向分化的相关性进行研究，希望探明PELP1在牙槽骨健康维护、损伤修复及牙周改建中的作用机理，进而为减缓牙槽骨吸收、维护牙齿健康开辟新的途径。为此，我们进行了如下实验：1PELP1在大鼠牙周组织中的表达及其影响因素采用免疫组织化学和RT-PCR的方法，从蛋白和基因水平分别检测PELP1在大鼠牙周组织中的表达及性别、年龄和体内雌激素水平对其表达的影响。结果发现：①PELP1在大鼠牙周组织中的表达与性别无关；②PELP1在大鼠牙周组织中的表达随着年龄的变化而变化，在生长发育期表达升高，在发育高峰期达到顶峰，在发育高峰期后表达下降；③PELP1的表达随着雌激素水平的降低而降低，随着雌激素的补充而升高。2PELP1在大鼠牙周膜成纤维细胞中的表达及与细胞增殖和骨向分化的相关性研究通过对大鼠牙周膜成纤维细胞（rat periodontal ligament fibroblast cells, rPDLFCs）的分离、培养、鉴定，采用RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光化学及Western blot技术，分别从基因和蛋白水平检测PELP1在rPDLFCs中的表达及其在细胞增殖和骨向分化过程中的表达变化。而后，利用siRNA技术下调rPDLFCs中PELP1的表达，并用RT-PCR和Western blot方法鉴定转染效果，以研究PELP1对rPDLFCs骨向分化能力的影响。结果发现：①rPDLFCs中存在PELP1mRNA及蛋白的表达；②PELP1表达水平随着rPDLFCs的增殖而升高；③PELP1表达水平在rPDLFCs骨向诱导分化后升高，与OCN表达趋势一致；④通过siRNA下调PELP1的表达后，rPDLFCs骨向分化受到抑制，表现为ALP和OCN的表达降低。3PELP1在人牙周炎牙周膜成纤维细胞中的表达及与细胞增殖和骨向分化的相关性研究通过对正常人牙周膜成纤维细胞（health human periodontal ligament fibroblastcells, H-hPDLFCs）与炎症人牙周膜成纤维细胞（inflamed human periodontal ligamentfibroblast cells, I-hPDLFCs）的分离、培养、鉴定，采用RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光化学及Western blot技术，分别从基因和蛋白水平检测PELP1在两组细胞中的表达及其在细胞增殖和骨向分化过程中的表达变化。结果发现：①在H-hPDLFCs和I-hPDLFCs中均存在PELP1mRNA及蛋白的表达；②PELP1参与调节hPDLFCs的生长与增殖，在H-hPDLFCs中与细胞增殖呈正相关，在I-hPDLFCs中与细胞增殖呈负相关；③PELP1的表达水平在两组hPDLFCs骨向分化中亦表现出不同的变化趋势，在H-hPDLFCs骨向诱导分化后升高，在I-hPDLFCs骨向诱导分化后降低。综上所述，本课题研究了雌激素受体调节因子PELP1在牙周组织中的表达及其对PDLFCs生长增殖及骨向分化的影响，首次发现PELP1在PDLFCs中表达并参与调节PDLFCs的生长增殖及骨向分化，为深入研究雌激素水平降低所致的牙周组织变化及相关疾病的治疗方法提供了新的思路。