金银花对细菌生物膜的抑制作用及其化学成分研究

论文摘要

目的:从中药金银花中筛选出对细菌生物膜有抑制作用的活性部位及单体化合物,并对单体化合物进行结构鉴定。方法:以BBF为体外筛选模型,用染色法对BBF染色,经酶标仪测量特定波长下吸光度值的大小来考察样品对BBF的抑制能力;采用溶剂提取法对金银花进行提取,D101大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20等色谱方法进行分离纯化,采用BBF模型对各个提取部位进行活性跟踪来筛选金银花中抑制BBF的活性部位,并从中分离纯化单体化合物;通过多种波谱分析手段（IR、UV、1H-NMR、（13）C-NMR等）对分离出来的单体化合物进行结构鉴定,分别考察各单体化合物对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌BBF的影响。结果:①金银花醇提部分的正丁醇萃取物其95%的大孔树脂洗脱物具BBF抑制作用;②从物金银花醇提物中分离并确定7个化合物的结构,分别为白果醇（ginnol）、肉桂酸（cinnamic acid）、咖啡酸（Caffeic acid）、原儿茶酸、獐牙菜苷（sweroside）、7-表断马钱子甙半缩醛内酯（7-epi-vogeloside）、熊果酸（ursolic acid）;③其中,sweroside、7-epi-vogeloside和ursolic acid对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌形成的BBF具有较强的抑制作用。结论:通过实验,初步确定了金银花中对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌BBF有抑制作用的活性部位,并从中分离出7个单体化合物,为进一步研究金银花中具有对BBF有抑制作用的成分打下基础。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略语
• 前言
• 文献综述
• 第一章 细菌生物膜的国内外研究概况
• 1 细菌性感染疾病及细菌生物膜的发现
• 2 细菌生物膜的定义
• 3 细菌生物膜的形成
• 3.1 细菌的定植
• 3.2 细菌生物膜的不可逆黏附
• 3.3 细菌生物膜的结构分化
• 3.4 细菌生物膜的发展成熟阶段
• 3.5 细菌生物膜的解聚及再定植阶段
• 4 细菌生物膜的特点
• 5 细菌生物膜的耐药机制
• 6 细菌生物膜的最新国内外研究进展
• 第二章 中药材金银花的研究进展
• 1 金银花化学成分概述
• 1.1 有机酸类成分
• 1.2 黄酮类成分
• 1.3 皂苷类成分
• 1.4 环烯醚萜类成分
• 1.5 其他成分
• 2 金银花的药理活性研究
• 2.1 金银花的抗病毒及抗菌作用
• 2.2 金银花的解热抗炎作用
• 2.3 金银花的抗血小板凝集作用
• 2.4 金银花具降糖作用
• 2.5 金银花的抗氧化作用
• 2.6 金银花的抗敏及免疫调节作用
• 第三章 国内外研究展望
• 实验研究
• 第一章 利用BBF 模型对金银花有效部位筛选的研究
• 材料和方法
• 1 材料和试剂、仪器
• 1.1 药材及菌种
• 1.2 试剂及仪器
• 2 实验方法
• 2.1 培养基的制作及染色剂、脱色剂配制
• 2.2 阳性对照药的制备方法
• 2.3 样品的制备方法
• 2.4 BBF 模型的建立方法
• 2.5 BBF 抑制率测定
• 结果与结论
• 1 金银花FLEB、FLEW 部分对BBF 的影响
• 2 金银花MR-40E、MR-95E 部分BBF 的影响
• 3 FR1、FR2 、FR3、FR4、FR5 部分对BBF 的影响
• 第二章 金银花化学成分及其对BBF 抑制作用研究
• 材料和方法
• 1 材料和试剂、仪器
• 1.1 实验药材
• 1.2 实验试剂及材料
• 1.3 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 金银花醇膏的提取
• 2.2 化合物的分离纯化
• 2.2.1 化合物Ⅰ的分离纯化
• 2.2.2 化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的分离纯化
• 2.2.3 化合物Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ的分离纯化
• 2.3 化合物的结构解析与鉴定
• 2.3.1 化合物Ⅰ的结构鉴定
• 2.3.2 化合物Ⅱ的结构鉴定
• 2.3.3 化合物Ⅲ的结构鉴定
• 2.3.4 化合物Ⅳ的结构鉴定
• 2.3.5 化合物Ⅴ的结构鉴定
• 2.3.6 化合物Ⅵ的结构鉴定
• 2.3.7 化合物Ⅶ的结构鉴定
• 2.4 单体化合物对BBF 的影响
• 2.4.1 单体化合物对E.Coli 形成的BBF 的影响
• 2.4.2 单体化合物对SA 形成的BBF 的影响
• 结果与结论
• 讨论
• 结语
• 致谢
• 参考文献
• 附图