新细胞粘附分子LSECtin识别活化T细胞的功能及其分子机制

论文摘要

C-型凝集素超家族在机体的天然免疫和继发免疫中发挥着重要功能，主要包括病原微生物的识别与清除以及免疫细胞的识别与迁移等。LSECtin是本实验室在国际上率先克隆并研究的一种新型凝集素分子，人LSECtin（hLSECtin）cDNA全长1411bp，编码293个氨基酸，为Ⅱ型跨膜糖蛋白，与已知的凝集素分子DC-SIGN、DC-SIGNR和CD23为同一家族，共属于C型凝集素超家族。LSECtin特异表达于肝和淋巴结。由于其含有典型的CRD结构域（糖基识别结构域），体外证实LSECtin蛋白能够Ca2+离子依赖性的结合甘露糖，岩藻糖和N-乙酰葡萄糖胺。我们的前期研究强烈提示LSECtin符合典型C型凝集素分子的结构和功能特征，可能在机体免疫中发挥重要的功能（Liu et a1．J Biol Chem．2004，279：18748-58）。 本论文中，我们利用免疫组化结合免疫荧光共定位的实验方法，揭示LSECtin表达在肝脏的Kupffer细胞和窦内皮细胞，为LSECtin的功能研究奠定了组织学基础。为了证实LSECtin是免疫细胞粘附分子的假设，我们筛选了一系列血细胞系，其中活化的人白血病T细胞系Jurkat与sLSECtin-Fc融合蛋白表现出很强的结合能力，进而我们分析LSECtin能否识别生理状况下的血细胞，sLSECtin-Fc融合蛋白以及细胞膜表面的LSECtin均能粘附活化的外周血T细胞，这些结果表明LSECtin是肝脏中一种新的活化T细胞黏附分子。为了鉴定LSECtin在活化T细胞表面的配体，我们首先通过Far-Western实验确定了LSECtin在活化T细胞上的配体分子量，进而利用生物质谱技术鉴定配体，结果提示CD44为候选配体分子。在此基础上，我们进一步确证了LSECtin与CD44互为受体-配体分子对：（1）CD44封闭性抗体能抑制LSECtin与活化T细胞的粘附；（2）纯化的LSECtin蛋白能粘附瞬时表达的CD44；（3）纯化的CD44蛋白能粘附瞬时及稳定表达的LSECtin。配体分子的确立为深刻揭示LSECtin在肝脏的生物学功能提供了强有力的依据与线索。

论文目录

• 缩写词表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 主要仪器设备和常用试剂
• 第一章 LSECtin在肝脏的细胞表达谱
• 第二章 LSECtin与活化T细胞的粘附
• 第一节 sLSECtin-Fc与活化外周血淋巴细胞的粘附
• 第二节 细胞膜表面LSECtin与活化外周血淋巴细胞的粘附
• 第三节 sLSECtin-Fc与T淋巴细胞系的粘附
• 第三章 LSECtin在活化T细胞表面的配体鉴定
• 第一节 CD44的封闭性抗体抑制LSECtin识别活化T细胞
• 第二节 sLSECtin-Fc与瞬时表达的CD44的粘附
• 第三节 sCD44-Fc与瞬时、稳定表达的LSECtin的粘附
• 第四节 多种血细胞株CD44的表达及其与LSECtin的粘附
• 第五节 LSECtin与CD44多种剪切体的粘附
• 第四章 LSECtin与活化T细胞的粘附依赖于蛋白-糖链相互作用
• 讨论与总结
• 参考文献
• 其它工作
• （一） LSECtin的单克隆抗体制备与功能鉴定
• （二） LSECtin识别活化T细胞的生物学功能初探
• 在读期间发表与投稿的论文及申请的专利与基金
• 附录：综述
• 致谢