论文摘要
黄酮类的植物多酚一直受到医药界的高度关注,其中对槲皮素（Quercetin, QUE）的研究最为深入。槲皮素及其衍生物是自然界分布最广的黄酮类化合物,广泛存在于蔬菜、水果、干果、饮料和中草药中。研究表明具有强心、扩血管、降低血压、抗炎、抗氧化及清除氧自由基、降低血小板聚集、保护缺血再灌注损伤、免疫增强功能、抗肿瘤、抗突变、抗菌、抗病毒、镇痛的生理作用,但槲皮素生物利用度低,半衰期短,限制了其开发利用。多甲氧基黄酮是多酚类黄酮的甲基衍生物,具有良好的药代动力学特点和药效学优势。但天然多甲氧基黄酮的提取工艺至今无重大突破,得量有限,价格昂贵,使深入研究难以进行,我们对QUE进行了甲基化改造,获得高纯度低价位的3,3’,4’,5,7-五甲基槲皮素（3,3’,4’,5,7-pentamethylquercetin, PMQ）,克服了药源的瓶颈。本实验通过比较槲皮素和其衍生物五甲基槲皮素对血管的舒张作用,并探讨五甲基槲皮素舒张血管机制,为黄酮类化合物在心血管病的防治中开发新药提供实验依据。第一部分五甲基槲皮素对甲氧胺收缩主动脉环量效曲线的影响采用常规离体血管环实验方法,观察PMQ 1,3,10μmol·L-1,QUE 3,10,30μmol·L-1对甲氧胺（Methoxamine, METH）收缩主动脉环量效曲线的影响。结果表明:PMQ和QUE均能使METH量效曲线非平行性右移,最大收缩值降低,pD′2分别为5.62和4.78。对METH的缩血管作用产生明显抑制的最低浓度,PMQ为1μmol·L-1,QUE为10μmol·L-1。PMQ在10μmol·L-1能够使METH的EC50从给药前1.91μmol·L-1升至给药后的15.0μmol·L-1（P<0.05）,相比较QUE同样浓度,能够使METH的EC50从给药前1.55μmol·L-1升至给药后的5.70μmol·L-1（P<0.05）。第二部分五甲基槲皮素对内皮完整和去内皮主动脉环的舒张作用制备内皮完整和去内皮主动脉环,在制备去内皮的主动脉环时,将微型棉签插入血管环内腔,轻轻的旋转数圈,用ACh 100μmol·L-1舒张METH所致的收缩反应以检验内皮功能。采用常规离体血管环实验方法,观察PMQ 3,10,30μmol·L-1,QUE 10,30,100μmol·L-1对METH(30μmol·L-1)预收缩的内皮完整和去内皮主动脉环的舒张效应。结果表明:PMQ 3,10,30μmol·L-1对内皮完整组和去内皮组主动脉环均有舒张作用,且其对内皮完整组的舒张作用较去内皮组强（40.0%±4.2% vs 22.1%±3.8%,78.0%±4.4% vs 62.7%±9.9%,90.9%±3.4% vs 70.6%±6.4%,P<0.05）,同样,QUE 10,30 , 100μmol·L-1对内皮完整组的舒张作用较去内皮组强（ 43.2%±11.3% vs 27.0%±4.7%,70.6%±4.9% vs 45.9%±3.5%,97.0%±4.1% vs 56.4%±4.8%,P<0.05）。第三部分五甲基槲皮素舒张血管机制的探讨一、观察PMQ(1100μmol·L-1)对30,80 mmol·L-1氯化钾（KCl）诱发的主动脉环收缩的影响采用常规离体血管环实验方法。结果表明:PMQ能够明显舒张30 mmol·L-1 KCl引起的主动脉环收缩,对80 mmol·L-1 KCl引起的主动脉环收缩的舒张作用要弱于前者。对30,80 mmol·L-1KCl诱发收缩后PMQ舒张作用的量效曲线进行比较,后者的量效曲线明显上移,最大舒张效应降低,两者差异显著（P<0.05）。二、观察三种不同钾通道阻滞剂对PMQ舒张效应的影响采用常规离体血管环实验方法,观察ATP敏感性钾通道阻滞剂-格列本脲（Glibenclamide）、电压依赖性钾通道阻滞剂-4-氨基吡啶（4-AP）和Ca激活的钾通道阻滞剂-四乙胺（TEA-Cl）对PMQ舒张主动脉环效应的影响。结果表明:格列本脲组和4-AP组的血管舒张程度与对照组比较,无显著差异（P>0.05）,而TEA-Cl能够明显抑制PMQ的舒张血管作用（P<0.01）,可以使PMQ浓度为10μmol·L-1时,Rmax由（54.1±5.5）%降低至（21.8±4.7）%。三、观察PMQ对METH收缩主动脉环的2种收缩机理的影响采用常规离体血管环实验方法,主动脉环在正常K-H液中平衡后,换无钙K-H液冲洗45次,再浸泡平衡20 min后,加入30μmol·L-1 METH,肌条出现收缩反应（1相收缩,即依内钙收缩）,然后恢复原K-H液中Ca2+量2.5 mmol·L-1(即加入50μl 250 mmol·L-1 CaCl2于5 ml浴槽中)引起再次收缩（2相收缩,即依外钙收缩）,比较给PMQ前后肌张力的变化（计算依内钙收缩和依外钙收缩占原有总收缩幅度的百分率）。结果表明:1μmol·L-1,3μmol·L-1PMQ对METH依外钙收缩和依内钙收缩无影响,而10μmol·L-1PMQ对依外钙收缩有显著抑制（P<0.01）,30μmol·L-1 PMQ对依外钙收缩（P<0.01）和依内钙收缩（P<0.05）均有抑制。结论:1. PMQ和QUE均能使METH的量效曲线右移,最大收缩值降低。2. PMQ和QUE均能舒张内皮完整主动脉环和去内皮主动脉环,PMQ舒张主动脉环作用强于QUE。3. PMQ能够明显舒张30 mmol·L-1 KCl引起的主动脉环收缩,对80 mmol·L-1 KCl引起的主动脉环收缩的舒张作用要弱于前者。4. ATP敏感性钾通道阻滞剂-格列本脲和电压依赖性钾通道阻滞剂-4-氨基吡啶并不能影响PMQ的舒张血管效应,而Ca激活的钾通道阻滞剂-四乙胺能明显抑制PMQ的舒张血管效应。5. PMQ对依内钙和依外钙收缩均有抑制,且对依细胞外钙收缩的抑制强于对依细胞内钙收缩的抑制。
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