P2Y2受体在涎腺腺样囊性癌细胞中的表达及其激动剂作用的研究

论文摘要

背景和目的:腺样囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）是最常见的涎腺恶性肿瘤之一,也是口腔颌面部最具特征的恶性肿瘤,具有很强的浸润性和远处转移力,手术切除后常有复发和转移。其转移和复发的机制目前尚不清楚。三磷酸腺苷（Adenosine Triphosphate, ATP）是一种递质,作为细胞外的信号分子（第一信使）,通过激活细胞表面的两类受体（P2X和P2Y）,并通过第二信使系统调节多种生理反应。P2Y受体（G蛋白偶联型）在体内各种组织广泛分布,功能各异。不同亚型的P2Y受体通过G蛋白激活不同的胞内信号转导通路,执行特定的生理功能。Rapaport首先报道嘌呤核苷酸具有抗癌活性。目前研究表明,ATP能够抑制多种人类肿瘤细胞的生长,如前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌、卵巢癌、胃癌等,还有研究表明ATP能够减轻非恶性组织对化疗和放疗的抵抗性。西方国家,ATP应用于晚期癌症治疗已进行了小规模的临床试验。ATP抗癌机制的报道,除了激活细胞表面受体和第二信使系统调节作用,余未见报道。有文献报道,ATP通过激活癌细胞表面的嘌呤受体P2Y可以抑制某些癌细胞的体外增殖。然而,腺样囊性癌与嘌呤受体P2Y2之间的关系目前尚未见报道。本实验则采用免疫细胞化学的方法,来证实腺样囊性癌细胞表面P2Y2受体的存在,同时通过ATP作用于体外培养的腺样囊性癌细胞来研究ATP对于非高转移腺样囊性癌细胞株（SACC-83）和高转移腺样囊性癌细胞株（SACC-LM）的抑制作用,为以后进一步研究腺样囊性癌的转移和浸润机理奠定基础。方法:本研究对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83和SACC-LM进行体外培养,采用免疫细胞化学法检测P2Y2受体在SACC-83和SACC-LM细胞株中的表达;采用倒置显微镜观察不同浓度ATP作用后的细胞形态学及数目的变化;采用四甲基偶氮唑蓝（ Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法测定SACC-83和SACC-LM细胞分别在不同浓度ATP（0mM/L、0.1mM/L、0.2mM/L、0.4mM/L、0.8mM/L和1.6mM/L）作用和不同时间点（24h、48h和72h）的细胞增殖抑制变化的情况。结果:免疫细胞化学结果显示,腺样囊性癌细胞株SACC-83和SACC-LM细胞中P2Y2嘌呤受体成阳性表达,可见细胞膜上呈深棕褐色染色（阳性）,胞浆呈浅棕褐色（弱阳性）,而阴性对照组则无阳性表达。SACC-83和SACC-LM细胞间未见明显差异。显微镜观察结果显示,细胞数目随ATP浓度升高而递减。MTT法结果表明,ATP对SACC-83细胞和SACC-LM细胞的增殖有明显的抑制作用（P<0.05）,对SACC-LM细胞的抑制作用强于对SACC-83细胞的抑制作用,且其抑制作用与药物浓度和作用时间呈正相关,即随ATP浓度的增加和作用的时间延长,对细胞的抑制率增加。结论:（1） P2Y2嘌呤受体在SACC-83和SACC-LM两株细胞中均有表达,且两细胞株间未见明显差异。（2）ATP对SACC-83细胞和SACC-LM细胞的增殖有抑制作用,其抑制率与剂量和时间呈正相关,对SACC-LM的抑制作用强于对SACC-83的抑制作用,但其作用机制有待进一步研究。（3）ATP作为一种有效的抗癌药具有很好的开发前景。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢
• 四、缩略语表
• 五、附图