巢式RT-PCR检测胃癌患者腹腔灌洗液CK19 mRNA、CEA mRNA及临床意义

论文摘要

背景胃癌发病率在我国很高,死亡率居恶性肿瘤之首。胃癌的主要治疗手段是胃癌根治术,术后5年生存率为32%～40%,约30%～50%的患者发生腹膜转移,是导致患者死亡的重要原因。腹腔中存活的肿瘤细胞是腹腔转移和复发的基础。由于早期转移的癌细胞数量少,病灶小,对化疗药物相对敏感,此时如能及时检测到腹腔中存活的肿瘤细胞并对具体患者实施针对性的腹腔灌注化疗等措施将可以提高疗效。若错过时机肿瘤就会生长成为较大的病灶,其内部将含较多的乏氧细胞,对化疗药物的敏感性降低,治疗就极其困难。目前临床上尚缺乏判断某一患者是否需要腹腔灌注化疗的直接指标,如果能通过某种方法,把腹腔中存在转移癌细胞的患者从患者整体中区分出来,有的放失地给予治疗,将能提高这部分患者的疗效,同时也可以避免另一部分患者接受不必要的治疗。因此早期诊断胃癌腹腔转移,尤其是胃癌腹腔微转移对临床制定治疗方案及判断患者的预后都有重要的意义。腹腔灌洗液细胞学（peritoneal lavage cytology,PLC）检查是目前用于腹腔脱落癌细胞检测的常用方法,但其缺点是对微量癌细胞检测敏感性低,阳性率仅为14%～21%,有较高的漏诊率。超声、螺旋CT和腹腔镜亦难以发现早期腹腔内脱落的游离癌细胞（exfoliated cancer cells,ECC）灵敏度较低,部分阴性患者仍有腹膜复发,限制了其临床应用。近年,随着分子生物学的发展,RT-PCR方法能够在106～107个正常细胞中的发现一个肿瘤细胞,或从1g组织或1mL液体中检测出一个肿瘤细胞,使得早期检出ECC成为可能。腹腔灌洗液中是不存在上皮细胞的,若腹腔中检出上皮抗原,如细胞角蛋白CK19和CEA等,说明存在上皮来源的细胞,最可能是癌细胞。腹腔内CK19 mRNA和CEA mRNA在腹腔内易被RNA酶破坏,如能检测到腹腔中有CK19 mRNA或CEAmRNA的表达,则说明腹腔中有存活的游离癌细胞。因此,我们采用巢式RT-PCR方法对67例胃癌患者的腹腔冲洗液进行检测,通过观察各期胃癌腹腔冲洗液CK19 mRNA、CEA mRNA、ECC的阳性率,探讨它们与临床病理及腹膜转移的关系,以期为临床诊断和腹腔内化疗提供一个有价值的参考指标。目的采用巢式RT-PCR方法对胃癌患者腹腔冲洗液中CK19mRNA、CEA mRNA的表达情况进行检测,以期探索胃癌患者腹腔冲洗液中CK19mRNA、CEA mRNA的表达水平与胃癌临床病理特征的关系,以及CK19mRNA、CEA mRNA是否可以作为胃癌腹腔微转移的特异性标志物和巢式RT-PCR方法在腹腔微转移检测中的可行性。方法收集67例胃癌患者和8例胃良性病变患者术前腹腔冲洗液或腹水及外周血。腹腔冲洗液或腹水行H-E染色细胞学检查,采用巢式RT-PCR方法检测腹腔冲洗液或腹水中CK19 mRNA和CEA mRNA的表达,采用化学发光免疫法检测外周血CEA蛋白的表达,并以胃癌细胞SGC7901为阳性对照。结果67例胃癌患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA的阳性表达率为58.2%（39/67）;CEA mRNA的阳性表达率为53.7%（36/67）;CK19 mRNA和CEA mRNA的联合检测阳性率为67.2%（45/67）;皆高于细胞病理学检查19.4%（13/67）,而且此13例细胞病理学检查阳性患者CK19 mRNA、CEA mRNA检测结果均为阳性。CK19 mRNA、CEA mRNA阳性率与肿瘤胃壁浆膜受侵、淋巴结转移和胃癌分期明显相关（p＜0.05）。67例胃癌患者外周血中CEA蛋白的阳性表达率为34.3%（23/67）,与胃癌分期、淋巴结转移、远处转移、浸润程度相关（p＜0.05）,但对腹腔微转移的检测缺乏敏感性。结论采用巢式RT-PCR方法检测胃癌患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达敏感性高,对于早期诊断胃癌患者腹腔种植转移有一定临床价值。

论文目录

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