黑龙江省野生黑木耳菌种的遗传多样性分析

论文摘要

黑木耳是一种美味食用菌,同时又具有很高的药用价值,黑龙江省是我国黑木耳主产区,其生产的黑木耳畅销国内外,黑木耳产业的发展对促进黑龙江的经济和社会发展起了重要的推动作用。本研究主要是开展我国黑龙江省部分地区的野生黑木耳菌株的分子指纹分析研究,客观的评价黑龙江省的野生黑木耳菌株种质资源的遗传多样性,用于充分保护和利用野生黑木耳种质资源,开展黑木耳的良种选育,为将来杂交育种亲本的选择提供很好的理论依据。本研究从黑龙江省境内各地区范围内收集了30个野生黑木耳菌株,应用DNA标记技术（ITS、SRAP）对此进行了分子指纹分析。主要研究结果如下:1)本试验对采集自黑龙江省部分地区的30个野生黑木耳菌株采用组织分离法中的子实体分离的方法,将生长于木椴上的野生黑木耳,经多步分离和培养,以及出耳实验等方法,证明分离到的菌株为黑木耳菌株。2)ITS序列分析结果显示:所有供试菌株的ITS序列长度均为559bp,其中ITS1区长167bp,含有4个变异位点;ITS2区序列长度为234bp,变异位点较多,为12个;介于ITS1区于ITS2区之间的5.8S rDNA序列较保守,长度为158bp,只含有2个变异位点。所有供试菌株中ITS1的（G+C）%变化范围为:47.0%52.0%,ITS2的（G+C）%变化范围为:49.4%50.1%,ITS序列间的遗传距离变化范围为0.0000.013,平均为0.006,ITS分析显示菌株之间的遗传差异较小。3)从56个SRAP引物组合中筛选出能同时对所有供试菌株进行扩增的8对引物组合,分别是:em2+me3, em2+me6, em5+me4, em6+me1, em6+me6, em7+me5, em7+me6, em8+me4,用上述筛选出的引物对供试菌株进行扩增,并对其扩增图谱进行聚类分析。SRAP结果表明,8对引物共扩增出157条重复性良好的DNA条带,其中多态性条带122条,占77.71%;使用UPGMA（ Unweighted Pair-Group Method with the Arithmetic Averaging ）法构建进化树,30个菌株被分为6组,结果表明,黑龙江省野生黑木耳菌株间存在着丰富的遗传多样性。4)“138”号菌株与其余菌株遗传距离较远,可以作为将来杂交育种的亲本。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1. 引言
• 1.1 黑木耳概述
• 1.2 黑木耳的实用及药用价值
• 1.2.1 药用价值
• 1.2.2 食用价值
• 1.3 黑木耳的栽培技术
• 1.3.1 椴木栽培技术
• 1.3.2 袋料栽培技术
• 1.4 rDNA 序列在蕈菌分类发育研究中的应用
• 1.4.1 5S rDNA 序列分析
• 1.4.2 18S rDNA 序列分析
• 1.4.3 28S rDNA 序列分析
• 1.4.4 ITS 序列分析
• 1.4.5 IGS 序列分析
• 1.5 遗传标记及其在食用菌中的应用
• 1.5.1 形态标记
• 1.5.2 生化标记（主要指同工酶分析）
• 1.5.3 DNA 分子标记
• 1.6 研究目的与意义
• 2. 试验材料
• 2.1 供试菌株
• 2.2 供试培养基及其配方
• 2.2.1 马铃薯液体培养基
• 2.2.2 马铃薯固体培养基
• 2.2.3 孟加拉红固体培养基
• 2.2.4 LB 液体培养基
• 2.2.5 LB 固体培养基
• 2.3 DNA 提取系列试剂
• 2.4 电泳系列试剂
• 2.5 PCR 反应系试剂
• 2.6 克隆用系列试剂与材料
• 2.7 质粒提取液
• 2.8 仪器与设备
• 3. 试验设计路线
• 4.ITS 序列分析
• 4.1 菌种的分离与培养
• 4.1.1 菌种的分离
• 4.1.2 菌种的培养
• 4.2 DNA 提取
• 4.3 PCR 反应
• 4.4 ITS 片段的回收与纯化
• 4.5 ITS 片段的克隆及质粒纯化
• 4.5.1 扩增产物与载体的连接
• 4.5.2 大肠杆菌感受态细胞的制备
• 4.5.3 质粒DNA 的制备与纯化
• 4.5.4 重组质粒的酶切鉴定
• 4.6 ITS 片段测序及序列分析
• 4.7 结果与分析
• 4.7.1 基因组DNA 的提取效果
• 4.7.2 ITS 目的片段的扩增
• 4.7.3 PMD-18 载体与DNA 片段连接的鉴定
• 4.7.4 ITS 序列分析
• 4.7.5 系统发育分析
• 5.SRAP 分子指纹标记
• 5.1 DNA 的提取
• 5.2 SRAP 引物
• 5.3 引物筛选
• 5.4 PCR 扩增
• 5.5 凝胶电泳
• 5.6 银染
• 5.7 照相及数据分析
• 5.8 结果与分析
• 5.8.1 引物筛选
• 5.8.2 相似性分析
• 6. 讨论
• 6.1 基因组DNA 的提取
• 6.2 rDNA ITS 序列研究
• 6.3 SRAP 分子标记研究
• 7 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文