论文题目: 糖尿病大鼠阴茎海绵体勃起神经递质血管活性肠多肽的转基因研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 王华
导师: 沈周俊
关键词: 血管活性肠多肽,表达载体,质粒,糖尿病,大鼠,基因转导,阴茎
文献来源: 浙江大学
发表年度: 2005
论文摘要: 阴茎勃起的前提是阴茎海绵体平滑肌细胞舒张,主要受非肾上腺素能、非胆碱能(NANC)神经递质调控。NANC神经递质主要是一氧化氮(Nitric oxide,NO)和血管活性肠多肽(Vasoactive intestinal polypeptide, VIP)。VIP首先由Said和Mutt于1970年在《Science》杂志上阐述了其对周围和内脏血管的强烈舒张作用。阴茎勃起功能障碍(Erectile dysfunction, ED)本质上是阴茎海绵体平滑肌松驰功能障碍。 VIP节后神经纤维存在于动物和人阴茎海绵体组织中的,当阴茎勃起时VIP被释放,参与阴茎勃起调控。其通过VIP—cAMP途径调控(不同与NO—cGMP)。我们首先在《British Journal of Urology》报道了VIP的雄激素非依赖性,近来已为国际同道所认可。 糖尿病(Diabetes mellitus, DM)性ED患者日益增多。糖尿病ED患者的阴茎海绵体组织中VIP含量减少,海绵体注射VIP可引起阴茎勃起。目前,糖尿病ED的治疗包括口服PDE-5抑制剂、阴茎海绵体内或尿道内注射药物、负压装置、假体置入,但疗效较其它病因引起的ED差。浙江大学博士学位论文糖尿病大鼠阴茎海绵体勃起神经递质血管活性肠多肤的转基因研究 基因治疗是指利用基因工程技术治疗疾病。可设计为正常基因代替突变基因或引入基因以纠正特殊的病理生理障碍。就EO而言,目前基因治疗策略主要针对平滑肌松驰功能。可通过基因产物增加,改善平滑肌细胞松驰功能。 器质性EO基因治疗基本目标是使患者在无药物治疗时,有生理性勃起。其基本要求包括:①转入有效基因;②蛋白高表达,但不改变生理调控和/或正常表达部位,仅在性刺激下激活;③无毒性,无阴茎勃起异常,无严重副作用;④表达时间长。 目前用于EO基因治疗的有iNOS,eNOS,PnNOS,hSIo,CG尺P,BDN厂等基因,而VI尸基因治疗国内外均未见报道。 第一部乡全血管认专,!生肠多月太基因真核表达载体构建 目的 构建带有血管活性肠多肤(vIP)基因的重组真核表达载体,用于VI尸基因治疗阴茎勃起功能障碍的实验研究。 材料与方法 根据Sprague一Dawley(SD)大鼠Vlp mRNA全长序列设计引物,采用Trizol法从脑组织中提取总RNA,RT-尸CR扩增VI尸基因编码区全长序列,并与尸CR2.,载体丁热克隆,在凝胶图像分析仪上分析,并经31 OONA自动测序仪(ABI尸RlsMTM)测序以验证所构建oNA片段的正确性。将vl尸eoNA亚克隆入真核表达载体pcONA3.,,重组质粒共转染O日一5。大肠杆菌,大量扩增、纯化及回收,一80℃保存以供下一步研究用。血管活性肠多肽;表达载体;质粒糖尿病;大鼠糖尿病;基因转导;阴茎;大鼠浙江大学博士学位论文糖尿病大鼠阴茎海绵体勃起神经递质血管活性肠多肚的转基因研究 第四部分基因转导对血管认身性肠多肤老东因 表达影响的研究 目的 阐明阴茎海绵体勃起神经递质血管活性肠多肤基因,转导入糖尿病大鼠阴茎海绵体,表达过量vl尸mRNA及对其它重要组织器官的影响性。 材料与方法,、引物和探针: vI尸mRNA引物: 上游引物:5’CTGACATCTTGCAGAAT.GCC3’(1 51一170) 下游引物:5’GCCTTTCACGAGCTAAAGATG3’(696一716) 探针:5’GAGAATCTCCCTCACTGCTC3’(443一462) p一aetin引物: 上游引物:5’CAGAAGGACTCCI-A CGTG3’ 下游引物:5’GCTCGGTCAGGA-「CTTCATG3’ 探针:5,GCTCGGTCAGGA’1.CTTCATG3,2、采用TrjZol法分别提取各组动物阴茎组织、肝脏组织、肾脏组织和腹主动脉组织总RNA,以上述引物进行RT-PCR扩增VIP mRNA和p一aetin,PCR条件为95oC预变性2 min,94oC变性605,56oC退火605,72oC延伸455为一循环。共45个循环,最后72oC延伸1 0 min。采用DotB{ot法(探针DIG标记,变性和固定,预杂交,杂交,漂洗,封闭和显色反应)在lS一,000多功能凝胶成像仪下分别测定VIP mRNA和p一actin的旧V值。VI尸mRNA的相对含量二旧V v.p mRNA/旧V。一aetin。
论文目录:
论文摘要
中文摘要
英文摘要
论文正文
正文前言
第一部分：血管活性肠多肽基因真核表达载体构建
引言
目的
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
第二部分：糖尿病动物模型的建立
引言
目的
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
第三部分：血管活性肠多肽基因转导对糖尿病大鼠阴茎勃起功能影响的研究
引言
目的
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
第四部分：基因转导对血管活性肠多肽基因表达影响的研究
引言
目的
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
综述
附录
1．发表论文(列题)
2．BJU Int发表的论文(全文)
3．AJA发表的论文(全文)
致谢
发布时间: 2005-07-14
参考文献
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