缺氧对血脑屏障的影响及其分子机制

论文摘要

中枢神经系统的各类疾患:炎症、肿瘤、血管病变和外伤等的病理发生、进展都会涉及到缺氧这个环节。充分了解缺氧后神经系统解剖、生理变化,对临床认识这些疾病会有很大帮助。大多数神经科学研究者把目光投向了神经元—中枢神经系统内的特质细胞。其实缺氧在引起神经元的损伤前,血脑屏障的开放或功能异常已经发生,但缺氧如何引起血脑屏障的各种生理病理变化的?其分子机制如何?这是我们研究的焦点。所以,我们通过体外建立血脑屏障模型,初步探索了缺氧对血脑屏障组成的重要部分—脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞的影响,以及缺氧对血脑屏障屏障功能的作用,探讨了其中可能的分子生物学与病理生理机制。方法:1.采用脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共培养的三维细胞培养技术建立体外血脑屏障模型。2. HE染色观察细胞在多聚酯膜上的生长情况。检测共培养以后血脑屏障特异性酶γ-GT含量;测定经脑微血管内皮细胞间隙进入血脑屏障的荧光素钠（FLU,分子量376Da）的通透量,通透性用通透系数表示,记录不同时间点125I-BSA（分子量66kDa）在血脑屏障模型上的的通透量,以评价血脑屏障模型的功能状态。3.模拟在体缺氧状态,监测缺氧后不同时间点,脑微血管内皮细胞生长的外环境中氧分压（PaO2）、二氧化碳分压（PaCO2）、PH值、渗透压、葡萄糖含量的变化,以及乳酸脱氢酶（LDH）的含量;用流式细胞仪检测细胞体积的变化。采用激光共聚焦显微镜检测细胞浆内游离钙离子的变化。4.通过检测荧光示踪剂荧光素钠（FLU）通过血脑屏障量的变化,评价缺氧对血脑屏障的屏障功能的影响。5.采用半定量RT-PCR、Western-Blot的方法探索缺氧对血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达的影响。6.采用半定量RT-PCR、Western-Blot的方法探索缺氧对星形胶质细胞AQP4表达的影响。结果:1.用我们的分离培养方法获得的脑微血管内皮细胞在倒置显微镜下细胞呈多角形或“铺路石”形,单层贴壁生长。培养的细胞Ⅷ因子相关抗原免疫染色阳性,细胞纯度为90%。采用振荡培养法获得的1型星形胶质细胞GFAP免疫细胞染色呈阳

论文目录

• 一 摘要
• 中文摘要
• 英文摘要
• 二 研究论文
• 前言
• 第一部分 体外建立血脑屏障模型及其屏障功能的鉴定
• 第二部分 缺氧对脑微血管内皮细胞生长环境的影响以及脑微血管内皮细胞的应答反应
• 第三部分 缺氧对血脑屏障紧密连接蛋白表达和血脑屏障功能的影响
• 第四部分 缺氧对血脑屏障水通道蛋白-4（AQP4）的影响
• 结论
• 三 综述
• 四 攻读学位期间本人公开发表的论文
• 五 致谢
• 详细摘要