论文摘要
柞蚕是鳞翅目天蚕蛾科昆虫,现在主要是用来缫丝和食用蚕茧,经济价值有限。利用转基因技术导入外源基因,使转基因柞蚕用于生产药用蛋白,可以大大提高柞蚕的经济价值。芳香蛋白是柞蚕的贮藏蛋白,富含苯丙氨酸和酪氨酸,为柞蚕变态期提供芳香族氨基酸,因而对柞蚕幼虫的生命活动影响不大,因而可利用其启动子来研究转基因生物反应器。通过分析柞蚕的芳香蛋白的RNA序列,以及家蚕和天蚕的DNA序列比较发现,它们编码的氨基酸数目都是704,家蚕和天蚕的外显子的数目都是5个而且每个外显子的长度都相等,通过这些特征设计引物,经各种PCR方法,如普通的PCR,反向PCR,热不对称交错PCR等方法将得到的柞蚕芳香蛋白的DNA片段,连接到T载体测出序列,通过对序列分析,发现测得的序列具有真核基因的特征,连接点具有很短的保守序列,内含子的5′端含是一致顺序的GT,3′端含有一致序列的AG。5′端具有属于启动子特征的序列,TATA盒,GC盒。为确定其启动子的核心区域,将5′端序列以及其信号肽序列后面接上绿色荧光蛋白并在绿色荧光蛋白后面接上部分3′端结构基因,构建出5′Arylphorin-GFP-3′Arylphorin报告基因载体pAG,为以后用限制性内切酶切成具有不同长度的5′端序列的线性化载体,脂质体试剂盒转染不同的昆虫细胞系如SF9,SC,GV-1等,通过观察荧光强度来确定核心启动子区域,研究转基因柞蚕生物反应器奠定了基础。